胡永涛，刘洪智

冠状动脉（冠脉）支架植入术后可能发生冠脉支架内再狭窄，增加血管性死亡等心血管不良事件的发生率，影响冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）患者的预后[1]。因此，寻找冠心病患者术后再狭窄的危险因素，对降低不良预后发生率具有重要意义。白细胞共同抗原（LCA，CD45）是一组含量丰富的膜蛋白，在人T细胞中有CD45RA+T细胞、CD45RO+T细胞两种分型[2]。研究表明，CD45RA+T细胞、CD45RO+T细胞与冠心病具有重要联系[3]。高迁移率族蛋白B1（HMGB1）是一种炎性因子，而既往研究中冠脉支架植入术（CSI）可能导致炎症因子大量释放[4,5]。本研究拟通过探讨CSI后外周血CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞、HMGB1水平与支架内再狭窄的相关性，以期为临床预防支架内再狭窄提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2019年3月～2020年9月于江西鄱阳湖医院住院治疗并行冠脉支架植入术的122例冠心病患者为研究对象，根据术后1年内是否发生冠脉支架内再狭窄将患者分为再狭窄组（30例）和未狭窄组（92例），其中再狭窄组患者年龄50～75岁，平均年龄（62.36±9.12）岁，男性21例，女性9例；未狭窄组患者年龄50～75岁，平均年龄（62.48±8.54）岁，男性68例，女性24例。纳入标准：①患者符合冠心病诊断标准[6]；②病理资料及影像学信息完整者；③既往无心脏瓣膜病、心脏附壁血栓、心功能不全者；④30 d内无外伤史或重大手术史者；⑤经本院伦理委员会批准，患者自愿参加并签署知情同意书。排除标准：①近3个月内有炎症性疾病及严重肝肾功能不全者；②既往行冠脉支架植入术或冠脉旁路移植术者；③有免疫系统疾病或血液系统疾病者。查阅门诊及住院病历，收集患者一般资料，包括性别、年龄、体质指数（BMI）、收缩压、舒张压、吸烟史、饮酒史、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、支架直径、支架长度、支架置入数、冠脉病变血管。

1.2 主要试剂与仪器HMGB1 ELISA试剂盒（滁州仕诺达生物科技有限公司，货号：SND-H1639），CD4-FITC单克隆抗体（上海科敏生物科技有限公司，货号：BF00201），CD45RA-PE单克隆抗体（武汉艾美捷科技有限公司，货号：T5-223-T100），CD45RO-PE单克隆抗体（南京北鱼生物科技有限公司，货号：BYFG-61R-1254）。酶标仪（杭州奥盛仪器有限公司，型号：AMR-100），流式细胞仪（美国艾森公司，型号：NovoCyte）。

1.3 研究方法采集受试对象术后24 h晨起空腹肘静脉血5 ml，经肝素抗凝后待测。外周血经肝素抗凝后分离上层血浆，采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测患者术后24 h血浆HMGB1水平，操作步骤严格按照试剂盒使用说明书进行。外周血经肝素抗凝后分离下层细胞（采血后3 h内完成），采用流式细胞术检测CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞水平。调整细胞浓度为2×106个/ml，每个标本取100 μl，分别加入20 μl CD4-FITC、CD45RA-PE、CD45RO-PE单克隆抗体，混匀后避光孵育15 min，至液体澄清后离心，弃上清。加入PBS洗涤后离心，弃上清。将细胞悬浮于PBS洗涤液中，振荡混匀后采用流式细胞仪检测。术后随访1年，时间截止至2021年3月1日。期间患者自愿复查且行冠脉造影，若支架内或支架两端5 mm范围内管腔直径狭窄程度＞50%定义为再狭窄[7]，根据是否出现再狭窄分为再狭窄组（n=30）和未狭窄组（n=92）。

1.4 统计学分析利用统计软件SPSS 23.0进行数据分析，计量资料符合正态分布，以均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料以n表示，组间比较采用卡方检验；采用Pearson法分析冠脉支架内再狭窄患者外周血CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞与HMGB1水平相关性；采用受试者工作特征曲线（ROC曲线）分析外周血CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞、HMGB1水平对支架内再狭窄的预测价值；采用多因素Logistic回归分析影响冠脉支架内再狭窄的因素。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组基线资料比较两组在性别、年龄、BMI、收缩压、舒张压、吸烟史、饮酒史、TG水平、LDL-C水平、支架直径、支架长度、支架置入数、冠脉病变血管比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；再狭窄组TC水平高于未狭窄组，HDL-C水平低于未狭窄组，差异有统计学意义（P＜0.05），表1。

表1 两组基线资料比较

2.2 两组外周血CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞、HMGB1水平比较再狭窄组外周血CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞、HMGB1水平高于未狭窄组，差异有统计学意义（P＜0.05），表2。

表2 两组外周血CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞、HMGB1水平比较

2.3 支架内再狭窄患者外周血CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞与HMGB1水平的相关性Pearson法分析结果显示，冠脉支架内再狭窄患者外周血CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞与HMGB1水平均呈正相关（r=0.490、0.563，P＜0.05），图1～2。

图1 冠脉支架内再狭窄患者外周血CD4+CD45RA+T细胞与HMGB1水平相关性

图2 冠脉支架内再狭窄患者外周血CD4+CD45RO+T细胞与HMGB1水平相关性

2.4 外周血CD4+CD45RA+T细胞、CD4+ CD45RO+T细胞、HMGB1水平对冠脉支架内再狭窄的预测价值以外周血CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞、HMGB1单个指标检验值及三者联合预测概率值为检验变量绘制ROC曲线，结果显示，外周血CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞、HMGB1预测冠脉支架内再狭窄的曲线下面积（AUC）分别为0.897（95%CI：0.834～0.960）、0.884（95%CI：0.819～0.950）、0.889（95%CI：0.819～0.960），截断值分别为18.859%、28.738%、138.501 μg/L，特异性分别为85.9%、81.5%、84.8%，敏感度分别为83.3%、80.0%、86.7%；三者联合预测的AUC为0.957（95%CI：0.914～0.999），特异性为85.9%，敏感度为93.3%，图3。

图3 外周血CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞、HMGB1水平预测冠脉支架内再狭窄的ROC曲线

2.5 影响冠脉支架内再狭窄的多因素Logistic回归分析将患者术后是否发生冠脉支架内再狭窄作为因变量，以CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞、HMGB1、TC、HDL-C为自变量进行多因素Logistic回归分析，结果显示，CD4+CD45RA+T细胞、HMGB1是影响冠冠脉支架内再狭窄的独立危险因素（P＜0.05），表3。

表3 影响患者冠脉支架内再狭窄的多因素Logistic回归分析

3 讨论

冠心病是临床常见的心血管疾病，冠脉支架植入术是其治疗的常用方法，对闭塞冠脉血运重建有重要作用[8]，但其在临床的广泛应用，也使得术后支架内再狭窄的发生率升高，严重影响患者身心健康及生活质量[9]。冠脉支架内再狭窄的发生及机制较为复杂，以往研究中影响冠心病患者支架内再狭窄的危险因素，主要包括年龄、吸烟、血脂、冠脉病变血管等方面[10]。本研究中再狭窄患者TC水平高于无再狭窄患者，HDL-C水平低于无再狭窄患者，即两组患者血脂水平存在明显差异。准确评估冠心病患者冠脉支架植入术后再狭窄的发生风险，积极采取干预措施，有效改善预后。

研究表明，冠脉支架植入术可能会引起血管内皮损伤，促使平滑肌细胞增殖及迁移增加，刺激炎症因子大量释放[11]。HMGB1具有免疫调节功能，可诱导炎症疾病和自身免疫疾病的发生，通过与大量炎症因子相互作用，促进动脉粥样硬化的发生发展[12]。CD45分布在所有白细胞膜上，是信号传导的关键分子，其在动脉粥样硬化、血液恶性肿瘤等疾病中异常表达，参与炎症反应和免疫功能调节[13]。研究显示，CD45RA+T细胞、CD45RO+T细胞作为CD45在T细胞中的两种分型，在炎症性疾病及免疫性疾病中可发挥重要功能[14]。Alexandra等[15]研究结果中HMGB1、CD45在大鼠肝缺血再灌注损伤中有重要作用。本研究结果中发生冠脉支架内再狭窄的冠心病患者外周血CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞、HMGB1水平高于无再狭窄患者，且CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞与HMGB1水平均呈正相关。提示CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞、HMGB1的高表达可能与冠脉支架植入术后患者体内炎症水平有关。推测冠脉支架植入术后部分患者出现血管内皮损伤，促进平滑肌细胞迁移、增殖，CD4+CD45RA+T细胞经过刺激后分化为CD4+CD45RO+T细胞，后者生成并活化后通过分泌HMGB1等细胞因子，使得体内炎症反应程度增强，而炎症反应进一步加速患者病情进展。本研究ROC曲线结果显示，CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞、HMGB1对冠心病患者冠脉支架植入术后再狭窄有一定的预测作用，可辅助临床评估再狭窄风险，降低疾病发生率，与李高宇[16]研究结果部分一致。王玉等[17]研究结果显示，冠脉粥样斑块内CD45可反映病灶内炎症反应程度，影响病灶结构。本研究结果中CD4+CD45RA+T细胞、HMGB1是影响冠心病患者冠脉支架内再狭窄的独立危险因素，提示炎症反应可能会影响病灶结构，在患者预后中发挥重要作用。

综上所述，外周血CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞、HMGB1可能通过高表达参与冠心病患者术后支架内再狭窄的发生发展。CD45、HMGB1可作为评估冠心病患者预后的辅助指标，有助于预防支架内再狭窄的发生，但仍需大样本量的研究对结果进行验证。