曹宇皎 谢红梅 田虹 李江宁 刘荣 夏霏 颜雅慧 韦丽宾 韩雪

研究表明，种植体能否在复杂的口腔环境中长期行使功能，主要取决于其能否获得并维持骨结合［1⁃2］。而相关调查显示，种植体周围炎（Peri implant inflammation，PI）患病率高达19.80%，会破坏种植体周围骨组织，导致种植体松动，甚至脱落，从而影响种植体治疗效益［3］。故需及早采取可靠的诊疗、预防措施。黏蛋白⁃4（Mucin⁃4，MUC⁃4）是跨膜黏蛋白家族重要成员，参与炎症反应发生发展，已有报道证实其与牙周炎症有强相关性［4］。低氧诱导因子⁃1α（Hypoxia inducible factor⁃1 α，HIF⁃1α）能够激活宿主免疫反应，在牙周组织破坏、降解过程中发挥重要作用［5］。单核细胞趋化蛋白⁃1（Monocyte chemoattractant protein⁃1，MCP⁃1）属于趋化因子，具有促炎作用，能经由诱导组织损伤、刺激骨吸收等途径参与牙周组织破坏［6］。但关于三者与种植体稳定性关系及对PI 的诊断价值仍有待明确。故本研究尝试探讨龈沟液MUC⁃4、HIF⁃1α、MCP⁃1 与种植体稳定系数（Implant stability quo⁃tient，ISQ）值的关系及联合诊断价值。报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取华北石油管理局总医院口腔科2018年6月至2020年6月收治的104 例因牙列缺损行种植修复患者作为研究对象，其中PI 患者70 例作为观察组，种植体周围组织健康的患者34 例作为对照组。本研究经医院伦理委员会审批通过。

1.2 选取标准

纳入标准：①均因牙列缺损接受种植修复；②参考文献［7］确诊PD和种植体周围组织健康；③种植体行使功能3个月及以上；④患者或家属均知情本研究，自愿签订知情同意书。排除标准：①吸烟、酗酒者；②伴有口腔癌者；③种植修复前已存在牙周炎症者；④妊娠期、哺乳期女性；⑤种植体存在咬合创伤者。

1.3 方法

于所有患者入院当日采集龈沟液样本，取样位点为每个种植体的颊（唇）侧近远中各2 个位点，将待取部位的小龈上菌斑、牙石仔细去除后财经无菌干棉球隔湿，吹干牙面（气枪吹10 s），将纸尖轻轻插入种植体龈沟内，遇到轻微阻力即止，30 s 后取出，取相同长度（2 mm）的滤纸条置入含有PBS 缓冲液（200 μL）的Eppendorf 管内，震荡30 min，在4℃条件下进行离心处理，离心速率为10 000 r/min，离心时间为10 min，半径为10 cm，取上清液，采用赛默飞Multiskan Sky 全自动酶标仪及试剂盒以酶联免疫吸附法检测龈沟液MUC⁃4、HIF⁃1α、MCP⁃1 水平。

1.4 观察指标

收集两组临床资料，包括年龄、性别、体质量指数（Body mass index，BMI）、牙列缺损原因、种植体行使时间、ISQ 值等资料，其中ISQ 值采用Os⁃stell Mentor 分析仪进行测定，数值范围为1～100，数值越高，提示种植体稳定性越高［8］。

1.5 统计学分析

采用统计学软件SPSS 22.0 处理数据，符合正态分布的计量资料以（）描述，独立样本t检验；计数资料用n（%）表示，χ2检验；相关性分析采用Pearson 线性相关法；诊断价值分析采用受试者工作特征（ROC）曲线，联合诊断实施Logistic 二元回归拟合，返回预测概率logit（p），将其作为独立检验变量。P＜0.05 表明差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组临床资料比较

两组年龄、性别、BMI、牙列缺损原因、种植体行使时间差异无统计学意义（P＞0.05）；观察组ISQ 值低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组临床资料比较［（±s），n（%）］Table 1 Comparison of clinical data between the two groups［（±s），n（%）］

表1 两组临床资料比较［（±s），n（%）］Table 1 Comparison of clinical data between the two groups［（±s），n（%）］

资料年龄（岁）性别男女BMI（kg/m2）牙列缺损原因牙周病牙体缺损外伤种植体行使时间（月）ISQ 值观察组（n=70）42.16±6.59 31（44.29）39（55.71）22.67±2.12 24（34.29）34（48.57）12（17.14）5.83±1.26 81.87±4.20对照组（n=34）41.57±5.88 13（38.24）21（61.76）22.38±1.97 10（29.41）18（52.94）6（17.65）6.04±1.50 85.63±5.11 t/χ2值0.443 0.343 0.669 0.391 0.748 3.984 P 值0.659 0.558 0.505 0.696 0.456＜0.001

2.2 两组龈沟液MUC⁃4、HIF⁃1α、MCP⁃1 水平比较

观察组龈沟液MUC⁃4 低于对照组，HIF⁃1α、MCP⁃1 高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组龈沟液MUC⁃4、HIF⁃1α、MCP⁃1 水平比较（±s）Table 2 Comparison of gingival sulcus fluid MUC⁃4，HIF⁃1α，and MCP⁃1 levels between the two groups（±s）

表2 两组龈沟液MUC⁃4、HIF⁃1α、MCP⁃1 水平比较（±s）Table 2 Comparison of gingival sulcus fluid MUC⁃4，HIF⁃1α，and MCP⁃1 levels between the two groups（±s）

组别观察组对照组t 值P 值n 70 34 MUC⁃4（pg/mL）3.16±1.05 5.75±1.91 8.928＜0.001 HIF⁃1α（μg/L）582.44±194.14 291.76±97.25 8.229＜0.001 MCP⁃1（pg/mL）158.42±52.80 106.57±35.49 5.179＜0.001

2.3 龈沟液MUC⁃4、HIF⁃1α、MCP⁃1 与ISQ 值的相关性

Pearson 相关性分析，龈沟液MUC⁃4 与ISQ 值呈正相关，HIF⁃1α、MCP⁃1 与ISQ 值呈负相关（r=0.809、-0.686、-0.720，P均＜0.001）。

2.4 龈沟液MUC⁃4、HIF⁃1α、MCP⁃1 对PI 的诊断价值

绘制ROC 曲线结果显示，龈沟液MUC⁃4、HIF⁃1α、MCP⁃1 三者联合诊断PI 的AUC 为0.900，敏感度为85.71，特异度为82.35，大于各指标单独诊断（P＜0.05）。见表3、图1。

表3 龈沟液MUC⁃4、HIF⁃1α、MCP⁃1 对PI 的诊断价值Table 3 gingival crevicular fluid muc⁃4 and HIF⁃1 α、Diagnostic value of MCP⁃1 in PI

图1 龈沟液MUC⁃4、HIF⁃1α、MCP⁃1 对PI 的诊断价值Figure 1 Diagnostic value of gingival sulcus fluid MUC⁃4，HIF⁃1α，and MCP⁃1 for PI

2.5 龈沟液MUC⁃4、HIF⁃1α、MCP⁃1 对PI 发生危险度的影响

以ROC 曲线获取的截断值为界分为低水平与高水平。龈沟液MUC⁃4 低水平患者发生PI 的危险度是高水平患者的3.044 倍；HIF⁃1α 高水平患者发生PI 的危险度是低水平患者的倍2.008 倍；MCP⁃1高水平患者发生PI 的危险度是低水平患者的2.400 倍。见表4。

表4 龈沟液MUC⁃4、HIF⁃1α、MCP⁃1 对PI 发生危险度影响Table 4 Effect of gingival sulcus fluid MUC⁃4，HIF⁃1α，and MCP⁃1 on the risk of PI

3 讨论

MUC⁃4 兼具分泌型蛋白和膜结合型蛋白的双重特点，最早在气管⁃支气管黏液中被发现，参与多种炎症、免疫、肿瘤性疾病发病［9］。姜丹丹等［10］研究结果显示，与种植体周围组织健康患者相比，PI 患者龈沟液MUC⁃4 水平呈显著下降状态。本研究也发现，观察组龈沟液MUC⁃4 低于对照组，且其水平与ISQ 值呈正相关，可见MUC⁃4 下调不仅参与PI 发生，还会对种植体稳定性产生不利影响。分析原因，主要是由于MUC⁃4 蛋白下调后会导致寡糖侧链形成空间障碍，抑制配体和受体之间的相互作用，对细胞⁃细胞、细胞⁃基质间的正常作用造成破坏，并与基质金属蛋白酶因子共同参与口腔炎症发生过程［11］。本研究结果还显示，龈沟液MUC⁃4 单独诊断PI 价值良好，可作为临床诊断PI 的重要辅助指标。

HIF⁃1α 属于HIF⁃1 的组成亚基之一，在细胞低氧应激反应及调节应答中具有关键作用，且对多种促炎因子具有促进作用，能够通过炎症、氧化应激等途径参与炎症性、感染性疾病［12］。一项动物实验证实，牙周炎组织处于低氧或缺氧状态，HIF⁃1α 阳性表达会加重牙周炎症程度［13］。本研究结果与上述实验结果相符，并发现其与ISQ 值呈负相关。结合Afacan B 等［14］报道考虑为：在牙周炎症组织的成纤维细胞中，HIF⁃α 会通过应激性过表达刺激纤维母细胞增殖，从而应对低氧状态；同时，低氧条件下，HIF⁃1α 可经由多条信号通路加速炎症反应、诱导牙周膜细胞的凋亡和自噬性死亡，且其介导的低氧反应是炎症的重要反馈机制，参与牙周炎过程中的组织破坏。本研究还发现，龈沟液HIF⁃1α 在PI 诊断中表现出良好价值，能为临床早期诊断PI 提供有效依据。

MCP⁃1 属于趋化因子族群，是一种可激活多种骨细胞并加快细胞迁移的炎症细胞因子，是炎症反应过程中的重要递质。既往相关研究表明，牙周组织中的巨噬细胞、内皮细胞、成纤维细胞均可表达和分泌MCP⁃1 至牙龈组织及龈沟液中［15］。王仁兰［16］报道中指出，局部组织内MCP⁃1 水平会随着牙周炎症进展而升高。本研究结果证实，观察组龈沟液MCP⁃1 高于对照组，与ISQ 值呈负相关，推测原因，MCP⁃1 可在多种刺激因素下大量合成，还可在肿瘤坏死因子⁃α、白细胞介素⁃1β 等致炎因子的诱导下上调表达，从而参与牙周炎症发生发展进程［17］。同时，研究显示，巨噬细胞、内皮细胞、成纤维细胞具有调控破骨细胞介导骨吸收的作用，MCP⁃1可在上述多种细胞刺激下间接参与牙周骨稳态的调控［18］。且本研究表明，龈沟液MCP⁃1 水平对PI具有良好诊断价值，能够提供诊断信息。

此外，本研究创新性发现，龈沟液MUC⁃4、HIF⁃1α、MCP⁃1 联合诊断PI 的AUC 高达0.900，较各指标单独诊断明显提高，为临床及早诊断PI 提供更客观、可检测的数据支持，从而优化单纯依靠PD 及骨吸收变化的诊断方式。以各指标最佳截断值为界进行分析，龈沟液MUC⁃4 低水平、HIF⁃1α、MCP⁃1 高水平会显著增加PI 发生危险度，进一步佐证了龈沟液MUC⁃4、HIF⁃1α、MCP⁃1 在PI 诊治中的可能重要检测价值。本研究不足之处：病人例数较少，以及未对PI 患者治疗前后龈沟液MUC⁃4、HIF⁃1α、MCP⁃1 的动态变化进行监测，需作进一步分析。