姜 辉 ， 陈晓英 ， 次旦央吉 ， 巴桑旺堆 ， 达娃央拉 ， 鲜莉莉 , 永 忠 ， 洛桑旦增 ， 曹涵文 ， 张 强

(1.省部共建青稞和牦牛种质资源与遗传改良国家重点实验室 ， 西藏 拉萨 850002 ； 2.西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所 ， 西藏 拉萨 850009 ； 3.西藏聂荣县农牧业科学技术服务站 ， 西藏 聂荣 853500)

牦牛作为世界屋脊——青藏高原特有畜种，是当地重要经济支柱产业资源。近几十年，在我国改革开放的浪潮推动下，我国少数民族区域经济也出现了可喜的腾飞，尤其是青藏高原地区牧民的经济生活水平得到很大的提高。而原本被当作役用的牦牛现在更多是作为当地人民主要的肉食品和乳制品等蛋白食物的来源。由于我国青藏高原幅员辽阔，丰富的生态地理条件造就了大量具有各自特色的牦牛资源群体。虽然目前已有近10余个牦牛品种被收录入国家家养动物遗传资源名录[1-2]，但由于种群数量规模及特定栖息地生态条件依赖性的原因，还远远不能满足现有市场对牦牛产品的需求。故而大力开展地方牦牛优秀良种资源的挖掘及利用，是提高青藏高原牦牛良种覆盖度，保证市场供应充足的最佳途径。唐古拉山查吾拉山口作为入藏的千年古道[3-4]，不仅是川藏线上重要的旅游风景区，同时也是青藏高原重要的牧场之一，在西藏地区的牦牛养殖产业中占据举足轻重的地位。迄今为止，当地牧民已有近千年的牦牛养殖历史，而且由于自然选择的作用，当地已形成兼顾高原生态适应性优良和生产力高的牦牛地方资源群体——查吾拉牦牛。然而有关该类群的研究尚不充分，仅有少量关于其生长及产肉性能的研究[5]。本试验从对查吾拉牦牛资源群体的泌乳性能及血液生化指标的分析入手，对该群体遗传资源特性进行更深层次的挖掘，以期为今后该资源的品种鉴定申请及开发利用提供基础资料。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 血清生化指标测定所用全部试剂，均购自宁波美康生物科技有限公司；血常规指标测定全部试剂，均购自日本SYSMEX(希森美康)株式会社。

1.2 主要仪器 BT3501-C2型电子秤，无锡大树精工科技有限公司产品；UL40AC型乳成分分析仪，优创科技产品；贝克曼库尔特Audio800生化分析仪(美国)；西斯美康XE2100全自动血液细胞分析仪(日本)。

1.3 试验动物 泌乳性能测定：15头4～5岁的健康经产雌性查吾拉牦牛；血清生化及血常规指标测定：24头4～5岁放牧牦牛。

1.4 试验方法

1.4.1 泌乳性能测定 随机选择健康的经产成年雌性查吾拉牦牛15头(4～5岁)为测试牛。采样及动物饲养地为那曲聂荣县嘎确牧场查吾拉牦牛选育基地(平均海拔在4 700 m左右；东经：92.295 74°；北纬：32.111 93°)，试验自2019年7月1日开始，至同年9月28日结束。测试母牛均为日间放牧饲养及夜晚圈养模式，测定日当晚将母牛与犊牛隔离，次日清晨7点前进行人工挤奶，20 min挤乳后进行称乳，每隔2 d循环测定挤乳量。每次采集的乳样混合后放入冰箱中冷藏保存，第2天早晨送检，具体操作参考已有研究的试验设计[6-7]。试验测定指标包括日产乳量、非脂乳固体、脂肪、蛋白质、乳糖和酸碱度(pH)。挤乳量测定用电子秤称量，乳品质测定用乳成分分析仪进行测定。

1.4.2 牛血清生化指标测定 选取放牧牦牛24头，年龄4～5岁。试验前1天晚8点后禁食禁水，试验当天早上7点空腹用非抗凝真空管颈静脉采血5 mL，静置后3 500 r/min离心10 min分离血清，-80 ℃超低温冰箱保存备用。样品采集时间为2020年5月份。使用贝克曼库尔特Audio800生化分析仪(美国)检测血清中39项生化指标：总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、白球比(A/G)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷草转氨酶/谷丙转氨酶(AST/ALT)、谷氨酰胺转移酶(GCT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆汁酸(TBA)、前白蛋白(PA)、肌酸激酶(CK)、肌酸酶同工酶(CKMB)、 乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸(HBDH)、C反应蛋白 (全量程，CRP)、淀粉酶(AMY)、钾(K)、钠(Na)、氯(Cl)、钙(Ca)、二氧化碳(CO2)、镁(Mg)、磷(P)、尿素氨(BUN)、肌酐(Cr)、胱抑素C(CYS-C)、β2-微球蛋白(β2-MG)、葡萄糖(GLU)、尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHOL)、高密度脂蛋白(HDL)、阴离子间隙(AG)、渗透压(OSM)和尿素氮/肌酐(BUN/Cr)。

1.4.3 牛血常规指标测定 选取放牧牦牛24头，年龄4～5岁。试验前1天晚8点后禁食禁水，试验当天早上7点空腹用抗凝真空管颈静脉采血5 mL，用于血常规的测定。使用全自动血液细胞分析仪检测血液中的16项血常规指标：白细胞(WBC)、中性粒细胞百分比(NEUT)、淋巴细胞百分比(LYMPH)、单核细胞百分比(MONO)、嗜酸性粒细胞百分比(EO)、嗜碱性粒细胞百分比(BASO%)、嗜碱性粒细胞绝对值(BASO#)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、红细胞体积分布宽度-CV(RDW-CV)、血小板体积分布宽度(PDW)、平均血小板体积(MPV)、血小板压积(PCT)和大血小板比率(P-LCR)。

1.4.4 数据处理 利用SPSS 23.0统计学软件对试验数据进行统计分析。其中血清生化指标的95%置信区间分析中，首先计算各项检测指标的数值分布是否符合正态性检验(P>0.05)，并计算平均值(Mean)和标准差(SD)。若不符合正态分布的指标，则应用百分位法(P5%～P95%)确定其参考区间。

2 结果

2.1 查吾拉牦牛产奶量测定 查吾拉牦牛日产奶量测定结果如表1所示，7月份日产奶量最高,为(3.47±0.33)kg，而8月份和9月份日产奶量分别为(3.32±0.26) kg和(2.25±0.49) kg，3个月份日产奶量平均为(3.14±0.38)kg。其中7月份与8月份日产奶量组间无差异(P>0.05)，但9月份与7、8月份的日产奶量间存在显著差异(P<0.05)。

表1 查吾拉牦牛不同月份日产奶量测定

2.2 查吾拉牦牛乳品质测定 查吾拉牦牛乳品质指标测定结果见表2，脂肪含量为(6.61±0.89)%，非脂乳固体含量为(9.30±0.29)%，乳糖含量为(5.95±2.32)%，固形物含量为(0.75±0.03)%，蛋白质含量为(3.40±0.10)%，pH为6.53±0.08。

表2 查吾拉牦牛乳品质测定结果

2.3 查吾拉牦牛生化指标检测 成年雌性查吾拉牦牛39项生化指标检测结果如表3所示，数值最高的指标主要包括α-羟丁酸为(829.26±111.72)U/L、乳酸脱氢酶为(808.70±93.10)U/L、肌酸激酶为(238.79±146.69)U/L、肌酸酶同工酶为(176.18±46.00)(U/L)，数值最低指标主要包括尿素氮/肌酐为0.06±0.02、β-2微球蛋白为(0.10±0.06)mg/L、胱抑素C为(0.10±0.02)mg/L、甘油三酯为(0.18±0.10)mmol/L。经过分析鉴定获得查吾拉牦牛血清生化指标可参考范围，并以95%置信区间表示(表3)，其中A/G、TBIL、DBIL、IBIL、AST、AST/ALT、GCT、CHE、CK、AMY、K、B2-MG、GLU和BUN/Cr均不符合正态分布曲线，采用百分位法计算获得参考值范围。

表3 查吾拉牦牛生化指标检测

2.4 查吾拉牦牛血常规检测 成年雌性查吾拉牦牛16项血常规指标检测结果及各指标的95%置信区间如表4所示，查吾拉牦牛的血红蛋白含量为(130.60±4.43)g/L、红细胞平均体积为(53.31±1.87)fl、红细胞体积分布宽度-CV为(37.48±1.37)%，此3项指标均较高。

表4 查吾拉牦牛血常规检测

3 讨论

产奶量作为草食动物重要经济性状一直备受关注，尤其是在中国水牛[8]和国外引入的商业奶牛品种[9-10]。而牦牛作为我国青藏高原牧区牧民的乳制品蛋白食物的主要来源，牦牛的产乳量和乳品质也越来越受到重视[11-13]。目前，我国多个地方牦牛资源群体的泌乳特性及其品质的理化特征得到鉴定[14-17]。

从本试验结果可知，同为青草期7月份的放牧水平下，查吾拉牦牛日产奶量(3.47±0.33)kg显著(P<0.05)高于昌台牦牛(2.69±0.18)kg[6]、天祝牦牛(0.85±0.251)～(1.40±0.26)kg及甘南牦牛(0.88±0.191)～(1.33±0.36)kg[18]、金川牦牛(1.75±0.11)kg[19]、果洛家牦牛(1.49±0.27)kg[20]，并与亚丁牦牛7月份产奶水平[月产奶量：(92.69±16.26)kg]相当。另外查吾拉牦牛在8、9月份产奶量与昌台牦牛及亚丁牦牛的产乳量基本相当[6,21]，且无显著差异(P>0.05)，然而却显著(P<0.05)高于金川牦牛[19]及果洛加牦牛[20]，表明查吾拉牦牛与昌台牦牛、亚丁牦牛在产乳量水平上优于甘南牦牛、天祝牦牛、金川牦牛、果洛家牦牛，而查吾拉牦牛与亚丁牦牛的产乳量在青草期更为突出。

本试验中查吾拉牦牛的7～9月份的产乳量也均高于西藏3个著名牦牛资源品种——嘉黎牦牛、帕里牦牛和斯布牦牛[22]。有趣的是，通过与2个涉及昌台牦牛产乳量的研究[6，21]进行比较，发现2个研究关于昌台牦牛6～10月份产乳量存在很大分歧，这可能是由于不同牧场间的植被结构和牧草产量不同，对放牧牛只的产乳量产生间接影响[23]。另外，就查吾拉牦牛而言，本试验中该群体产乳量在7月份 为产乳量峰值，随之逐月下降，这个规律与亚丁牦牛一致[21]，然而2个有关昌台牦牛产乳量的研究都表明8月份为昌台牦牛产乳量峰值月[6,21]。这说明牧场的不同地理气候等生态因子对牧场动物的泌乳量存在影响，如不同季节光照、气温气湿、植被生长规律等[24-25]。

从查吾拉牦牛乳液品质指标来看，其乳脂率、非脂乳固体、乳糖均与亚丁牦牛[21]、昌台牦牛[21]、嘉黎牦牛[22]、斯布牦牛[22]、帕里牦牛[22]无显著差异。但其蛋白质含量介于亚丁牦牛和昌台牦牛之间[21]，略低于嘉黎牦牛、斯布牦牛和帕里牦牛。但由于此前的各项研究的样本量均较少[22]，所以该结果是否能够准确作为参考用于比较牦牛品种的真实水平还需进一步确认。

众所周知，鲜乳中的乳酸菌在将乳糖转化为乳酸从而降低鲜奶酸度的同时，还会分解部分鲜乳的营养成分。本试验中查吾拉牦牛的鲜乳pH为6.53±0.08，符合正常牛鲜乳酸碱范围，且优于亚丁牦牛和昌台牦牛[21]，故而查吾拉牦牛鲜奶的酸碱环境更利于保持其营养成分及牦牛鲜牛乳品质[26-27]。

血清生化指标和血常规指标不仅被广泛的应用于机体各类疾病的辅助诊断，而且一定程度上能够反映出动物在适应某种生存条件下的基本生命体征。所以建立一个物种乃至物种内一个品种或类群的血清生化指标和血常规指标评价体系，是对其在特定生存生态环境下的最好理解，能够帮助加深对特定遗传资源类群的适应性进化和资源特质的理解。

牦牛作为在广袤的青藏高原广泛分布的特有畜种，长期特定栖息地的自然选择造就了其独有的生理生化特征，也塑造了其丰富而多变的遗传多样性特征，从而也导致了不同地理分布类群的生化指标的不同。目前，我国已针对不同牦牛品种及地方类群的生化指标开展调查，包括麦洼牦牛[28]、青海大通牦牛[29]和甘南牦牛[30]等。本试验对查吾拉牦牛的血液指标进行检测，发现血清生化指标中GLU、CHOL、HDL、TP等指标以及血常规中WBC、EO、BASO等指标与诸多其他牦牛品种血液内含量无显著差异[28-32]。然而，由于不同分布地区的特殊生态环境因子及品种特异性的原因，尚有大量指标在相同年龄段的牦牛品种间存在显著差异。

在血清生化指标中，查吾拉牦牛DBIL、ALT和AST三项指标与其他牦牛相比均存在显著差异。DBIL是由间接胆红素进入肝后受肝内葡萄糖醛酸基转移酶的作用与葡萄糖醛酸结合生成的，其升高说明经肝细胞处理后胆红素从胆道的排泄发生障碍[33]。Cr是肌肉在人体内代谢的产物，主要由肾小球滤过排出体外，其在体内的生成恒定，是反映动物肾代谢功能的重要指标[34-35]。本试验结果显示，查吾拉牦牛的DBIL、UA显著低于(P<0.05)麦洼牦牛，而其Cr也显著低于(P<0.05)麦洼牦牛[31]、甘南牦牛[30]和海北牦牛[29]，表明查吾拉牦牛的肝胆代谢能力较好。

ALT和AST是诊断病毒性肝炎、中毒性肝炎的重要指标。其活性增高与许多因素有关，如营养不良、心肌病、脑血管病、骨骼肌疾病和胰腺炎等。此外，某些药物和毒物，如氯丙嗪、奎宁、水杨酸制剂等，亦可导致血清ALT活性增高。在人类医学诊断中界定谷草转氨酶/谷丙转氨酶(AST/ALT)大于1时，表明患者肝脏有实质的广泛损伤。本试验中，查吾拉牦牛的ALT和AST的指标显著低于(P<0.05)甘南牦牛，也同样表明查吾拉牦牛的肝功能状态较好。出现这种差异一方面可能由于品种的特异性，另一方面可能是其栖息地高海拔、环境污染及外界干扰少等原因导致其所在生活空间更为健康。但值得注意的是，目前全部已公布的不同牦牛品种的AST/ALT均小于1[30-31,36-37]，表明我国牦牛资源整体在放牧条件下生理状态良好。

在血常规检测指标中，HGB、MCV、RDW-CV三项指标在全部被检指标中为最高。HGB 是血液中运输氧的主要成分，HGB 含量高说明营养状态良好，机体代谢旺盛。高海拔地区动物为了适应高原低氧，其机体内HGB浓度增加，以供应机体氧气需求。藏羊具有高的HGB浓度[38]。有研究表明,生活在3 700 m处的藏猪为适应高原低氧环境,主要表现为HGB浓度﹑红细胞压积增加[39]。以上报道中的结果均与本试验结果一致。表明高原动物通常通过增加HGB含量来增强机体的运氧能力,加强机体对高原低氧环境的适应性[40]。RDW-CV是表示红细胞大小是否均匀的指标，偏高表示红细胞大小不匀。MCV是红细胞与正常红细胞体积的比较，临床上多根据红细胞体积将其分为3个类型，即小细胞、正细胞和巨细胞[41]。MCV是机体营养状况的评价指标之一，与RDW-CV一同作为判断动物是否贫血的指标。MCV、RDW-CV高于正常水平表明查吾拉牦牛的血氧运输能力较好。

本试验利用统计学算法，分析得到查吾拉牦牛3～4岁成年健康母牛的39个血清生化指标和16项血常规指标的95%置信区间，为今后牦牛生化检测辅助诊断提供科学的参考范围。实际上大量关于家养动物的血液学指标的研究主要是参照人或其他模式生物的血液指标正常范围参考值，而针对家养动物物种，尤其是品种内参考值更加有助于辅助诊断及品种资源状态评价。

综上所述，本试验显示查吾拉牦牛在泌乳量及营养成分等诸多方面较众多牦牛资源品种具有一定优势，并确认7月份为该品种在产区栖息地的产奶量峰值月。其次，本试验明确了成年雌性查吾拉牦牛的39项血清生化指标和16项血常规指标的参考值范围，为今后牦牛生化检测辅助诊断提供科学的参考。