薛涛 田海 王吉东 岳勇铭 赵越超 黄浩宇 黄乐冉

摘 要：探索羌白消痛胶囊脂溶性成分的最佳提取工艺，鉴别制剂中羌活、白芷、三七 3味药材.采用正交设计实验，以总皂香豆素的含量为考核指标，优选羌活等药材脂溶性成分的提取工艺;采用薄层色谱法（TLC）对制剂中羌活、白芷、三七进行鉴别.研究结果表明，最佳醇提工艺为：8倍量70%乙醇提取一次，时间为1 h.醇提工艺设计合理，重现性好，适合于工业化生产;鉴别方法专属性强，可用于羌白消痛胶囊的质量控制.

关键词：总香豆素; 回流提取;含量测定;薄层鉴别

[中圖分类号]R284.1/R282.5   [文献标志码]A

中药复方制剂因为所含成分复杂，各成分之间可能存在相互影响，给复方制剂的质量评价带来一定困难，鉴别其有效成分是中药质量检测的依据.实验室中常用的提取脂溶性成分的方法有渗漉法、浸渍法、索氏提取法、加热回流提取法等，合理的选用提取方法对整个实验有很重要的意义.羌白消痛方为一经验处方，经多年临床验证，药效明确.处方由八味中药组成，其中羌活性温，味辛、苦，具有散寒、祛风、除湿、止痛之功效，具有明显的消痛、抗炎、改善血液循环及保护肝脏的作用[1];白芷性温，气芳香，味辛，微苦，具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓的作用，临床广泛应用于感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻渊、牙痛、白带、疮疡肿痛等病症，有较好的疗效[1-2];两药共用，同为君药.羌活、白芷中均含有香豆素类成分，为羌活、白芷发挥消痛作用的主要活性成分.[1-2]本实验采用紫外-可见分光光计法，以异欧前胡素为指标物质，测定药材脂溶性提取物种中香豆素的含量，建立其含量分析方法，确定最佳提取工艺;选用乙醇加热回流提取法提取，方便省时.

1 材料与试剂

羌活、白芷、蛇床子、三七、白术（安徽沪谯中药饮片厂）;三氯甲烷、乙酸乙酯、冰醋酸、正己烷、甲醇等均为分析纯（北京化工厂）;异欧前胡素（国家标准物质研究中心，100620）.

2 紫外-可见分光光度计法测定总香豆素含量

标准品溶液的制备 取干燥至恒重的异欧前胡素对照品2 mg，精密称定，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得.

供试品溶液的制备 取干燥至恒重的干燥粉末约0.05 g，精密称定，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得.[3-4]

最大吸收波长的测定 配制欧前胡素标准品溶液.按《中国药典》2015年版四部“紫外-可见分光光度法”操作，以甲醇为空白，在200～500 nm波长进行扫描.[4]对照品溶液在301 nm波长处有最大吸收峰，《中国药典》2015版规定的检测波长为300 nm，综合扫描结果，确定测定波长为300 nm.

线性关系考察 分别精密量取对照品欧前胡素溶液0.3，0.4，0.5，0.6，0.7 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇定容，以相应试剂作为空白溶液，在波长300 nm处测其吸光度，以总香豆素的含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归，得回归方程为Y=52.808X-0.017 6，r=0.999 8，表明总香豆素含量在0.040 6～0.121 8 mg范围呈良好线性关系.

方法学考察 依次进行精密度实验、重复性实验和加样回收实验，各实验RSD值均小于2.0%，回收实验的平均回收率为101.2%，表明分析方法适用于提取物中总香豆素含量测定.制备好的供试品溶液在室温条件下放置，75 min内溶液中总香豆素的含量几乎不变，表明供试品溶液至少在75 min以内稳定.

3  药材脂溶性成分提取工艺筛选

药材吸醇量测定 按处方比例称取药材共100 g，加入浓度为70%的乙醇1 000 mL，浸泡过夜，滤过，称量滤液体积，计算吸醇量.分别考察三批药材吸醇量，药材平均吸醇量为58 mL.

正交实验 设计因素水平见表1.以乙醇浓度、加醇量、提取时间、提取次数为考察因素，采用四因素三水平正交设计，以总香豆素含量为考核指标进行实验.按处方比例取醇提药材100g，共9份，按因素水平表（表1）的设计条件进行乙醇回流提取，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩干燥成干膏[4-6]，正交实验表见表2，方差分析见表3.结果显示，以欧前胡素含量为考核指标，影响工艺因素大小的次序依次是B>A>D>C，B因素为主要影响因素，A，C，D因素影响较小;加醇量的影响具有显著性差异（P<0.05），所以选择最佳提取工艺为A1B2C1D1，即用8倍量70%乙醇提取一次，时间为1 h.

验证实验 取药材1 000 g，共三份，按所确定的最佳提取工艺，加8倍量70%乙醇提取一次，时间为1 h，滤过，减压浓缩，测定，总香豆素的含量为9.12 mg/g.验证结果表明，按该工艺提取，产物中香豆素含量较稳定.

4 鉴别实验

4.1 胶囊剂中白芷的鉴别

取本品内容物粉末适量，加甲醇30 mL，超声处理20 min，滤过，滤液浓缩至2 mL作为供试品溶液.另取白芷对照药材，同法制成对照药材溶液.再取处方中缺白芷的其他药材，按“胶囊剂制法”制成阴性对照品及对照品溶液.[4-7]

按照《中国药典》2015年版第四部“0502薄层色谱法”实验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿∶甲醇∶水（7∶3∶1）作为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视，结果见图1.图1结果表明，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显示相同颜色斑点，阴性无干扰.

4.2 胶囊剂中羌活的鉴别

取本品内容物粉末适量，加甲醇25 mL，加热回流30 min，滤过，挥干溶剂，残渣加甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液.取羌活对照药材，同法制成对照药材溶液.取处方中除羌活的其他药材，按“胶囊剂制法”制成阴性对照品并制成阴性对照品溶液.[7-10]202721CF-2710-420B-86C7-1BA5BC2CE632

照《中国药典》2015年版第四部“0502薄层色谱法”实验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯（4∶1）作为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视，结果见图2.图2结果表明，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显示相同颜色斑点，阴性无干扰.

4.3 胶囊剂中三七的鉴别

取本品内容物粉末适量，加乙醇25 mL，超声处理30 min，滤过，挥干溶剂，加水15 mL使溶解，加水饱和正丁醇萃取2次，每次15 mL，挥干溶剂，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液.取三七对照药材，同法制成对照药材溶液.取处方中除三七的其他药材，按“胶囊剂制法”制成阴性对照品并制成阴性对照品溶液.[11-12]

照《中国药典》2015年版第四部“0502薄层色谱法”实验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸（20∶4∶0.5）作为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置日光灯下检视，结果见图3.图3的结果表明，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显示相同颜色斑点，阴性无干扰.

5 结果与讨论

羌白消痛胶囊有效成分提取的最佳醇提工艺为：药材加8倍量70%乙醇提取一次，时间为1 h.该方法稳定可行，适合工业生产;TLC法鉴别出白芷、羌活、三七三味药材，阴性无干扰，重现性好，可以列入质量标准正文.

参考文献

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编辑：琳莉202721CF-2710-420B-86C7-1BA5BC2CE632