高彦军,林红卫,王在强,金发光

(空军军医大学第二附属医院呼吸内科,西安 710038;*通讯作者,E-mail:jinfag@fmmu.edu.cn)

随着工业化进程的发展,空气污染对气候、环境和健康构成了重大威胁,导致全球每年约700万人过早死亡[1]。大气颗粒物(particulate matter, PM)尤其是空气动力学直径小于2.5 μm的PM2.5,由于其体积较小,表面积较大,可以携带细菌和有毒化学物质进入细支气管和肺泡并不易排出,更易引起呼吸系统疾病和肺功能损伤[2]。多项流行病学调查及临床研究表明,PM2.5对慢性阻塞性肺疾病(COPD)、支气管哮喘、肺炎甚至肺癌的罹患或加重有着明确的相关性[3-6]。PM2.5导致肺损伤的主要机制是氧化应激和炎症反应,活性氧(ROS)的产生和炎性细胞因子的分泌都可以通过诱导肺泡上皮细胞凋亡引起肺损伤[7,8]。

细胞凋亡的主要途径有外源性途径(死亡受体途径)和内源性途径(线粒体途径)[9],有研究发现内质网应激也可以促进细胞凋亡[10]。Fas/FasL是死亡受体途径中的一组重要信号转导途径,当FasL与Fas结合后,细胞内相关分子形成死亡诱导复合物(DISC),随后催化Caspase-8前体激活,继而激活下游Caspase-3,最终导致细胞凋亡[11]。因此,Fas/FasL可能在PM2.5诱导肺泡上皮细胞凋亡,进而引起肺损伤中发挥重要作用。本研究通过建立PM2.5诱导大鼠肺损伤模型,探讨Fas/FasL途径在肺泡上皮细胞凋亡中的作用机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

家兔抗Fas、FasL、Caspase-8和Caspase-3多克隆抗体购自美国Abcam公司,FasL中和性抗体(NOK-2)、Annexin Ⅴ-FITC/PI试剂盒购自美国BD公司,Caspase-8特异性抑制剂(Z-IETD-FMK)购自美国R&D公司,辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔多克隆抗体购自Affinity公司,F-12K培养基、胎牛血清购自武汉普诺赛公司,兔抗GAPDH多克隆抗体、BCA蛋白定量试剂盒、SDS-PAGE凝胶制备试剂盒、RIPA裂解液及其他试剂均购自康为世纪公司。……