张 彤,周 妍,吴 巍

(首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系,北京 100069;*通讯作者,E-mail:weiwu207@ccmu.edu.cn)

萝卜硫素(sulforaphane,SFN)是一种从十字花科植物中提取具有抗癌潜力的化合物[1]。研究表明,在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中,SFN能触发微管断裂,抑制自噬溶酶体的形成导致细胞凋亡,但SFN抑制自噬溶酶体形成的机制尚未明确[2]。

研究表明,自噬参与囊泡的形成、运输和融合,而膜转运蛋白作为介导溶质、离子或药物跨生物膜选择性转运的重要跨膜蛋白,与囊泡运输和融合密切相关[3]。其中,RAB7蛋白作为转运蛋白,在细胞内的准确定位决定其所介导的囊泡能否正确抵达目的细胞器。RAB7交互溶酶体蛋白(RILP)是RAB7蛋白下游的效应蛋白,定位在溶酶体[4]。RAB7与GTP结合将RILP运送到细胞膜中,共同控制晚期内体和溶酶体的转运[5,6]。

溶酶体的功能与溶酶体膜蛋白有着密切的关系。其中,ATP6V0D1为溶酶体膜蛋白,具有质子泵的作用,为溶酶体水解酶提供酸性环境,影响溶酶体功能进而调控自噬途径[7]。我们推测,SFN通过调控RILP及溶酶体膜蛋白ATP6V0D1抑制自噬溶酶体的形成。本研究通过生物信息学结合免疫荧光染色及蛋白免疫印迹技术研究SFN对RILP及ATP6V0D1的调控作用,探讨在非小细胞肺癌中SFN抑制自噬溶酶体形成的分子机制,以便为肿瘤靶向治疗提供有效策略。

1 材料与方法

1.1 细胞株与试剂

人非小细胞肺癌细胞株A549细胞购自中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心;SFN购自美国Santa Cruz公司,β-actin抗体购自美国Cell Signaling Technology公司;RILP抗体、LAMP1抗体购自美国Proteintech公司。……