薛红超

（河南省长葛市疾病预防控制中心，长葛 461500）

结核病是一种由结核杆菌引起的慢性传染病，常累及肺部，由于缺乏特异性表现，肺结核易误诊为肺结节等肺部疾病[1-2]。目前临床实践中多采用痰涂片、结核菌素纯蛋白衍生物（pure protein derivative，PPD）试验等方法诊断结核病，但其常发生假阴性的情况[3]。然而结核感染T细胞γ-干扰素释放试验 （tuberculosis interferon-gamma release assay，TB-IGRA）是细胞免疫的体外诊断技术，已被认为是检测结核感染的首选手段[4-5]。结核分枝杆 菌 抗 体 （mycobacterium tuberculosis antibody，TB-Ab）检测主要通过体液抗原抗体反应来诊断结核感染[6]。本研究采用四种诊断方法对比分析，验证TB-IGRA、TB-Ab对结核病的诊断价值，以利于TB-IGRA、TB-Ab联合检测在临床实践中的推广应用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年3月至2020年12月在疾控中心治疗的216例疑似肺结核患者病例资料进行回顾性分析，肺结核病根据《WS 288-2017肺结核诊断》[7]标准诊断，肺部其他疾病诊断以《诊断学》（第9版）[8]为依据。216例疑似肺结核患者按照上述诊断标准分为肺结核组（n=151），男性92例，女性59例，平均年龄（56.03±18.45）岁，合并糖尿病5例；非肺结核组（n=65），男性42例，女性23例，平均年龄（55.78±18.07）岁，合并糖尿病4例。两组一般资料间差异无统计学意义（P＞0.05）。纳入标准：（1）疑似诊断肺结核患者；（2）近期未接受肺部疾病相关治疗者；（3）本研究中患者或家属均已签署知情同意书。排除标准：（1）存在恶性肿瘤患者；（2）存在严重心、肝、肾功能障碍患者。

1.2 方法 （1）TB-IGRA检测，采集患者静脉血4 mL，肝素抗凝，2 h内混匀后分装到本底对照管（N）、测试管（T）及阳性对照管（P）中培养。 将培养管轻柔颠倒混匀5次后迅速置37℃培养，培养（22±2）h，培养管3000 r/min离心，取上清行酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测（试剂盒购自北京万泰生物药业股份有限公司），N＞400 pg/mL时需重新测定。阳性评价标准：N≤400 pg/mL，T-N≥14 pg/mL，且≥N/4[9]。（2）TB-Ab检测，采用胶体金技术检测血清中结核杆菌抗体（试剂盒购自上海奥普生物医药有限公司），严格按照试剂盒说明书进行操作，评价标准是阳性：膜中央发现红色斑点；弱阳性：膜中央发现浅红色斑点。（3）痰涂片 采用抗酸染色镜检法观察抗酸分枝杆菌，严格按照抗试剂盒说明书进行操作，以每100个视野中抗酸分枝杆菌>3个为阳性。（4）PPD试验，于患者左前臂背侧1/3处皮内注射5IU PPD（北京祥瑞生物制品有限公司，国药准字S10960016），注射72 h后观察皮肤反应，以皮肤硬结大小为判断标准[4]：阳性（+）为硬结≥5 mm，阴性（-）则为硬结<5 mm。

1.3 统计学分析 采用软件SPSS 22.0处理数据，以[n，%]表示计数，资料进行χ2检验；以(±s)计量资料进行t检验，取α=0.05为检验水准，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组TB-IGRA、TB-Ab、痰涂片及PPD检出阳性率比较TB-IGRA、TB-Ab对肺结核病变的阳性检出率明显高于非肺结核组（P<0.05）；且肺结核组中TB-IGRA、TB-Ab及PPD的阳性检出率均显著高于痰涂片镜检（P<0.01）。见表1。

表1 两组TB-IGRA、TB-Ab、痰涂片、PPD阳性检出率[n(%)]比较

2.2 四种检测方式对肺结核的诊断价值 TBIGRA对肺结核的阳性预测值显著高于痰涂片镜检，而其诊断灵敏度则显著高于TB-Ab、痰涂片镜检及PPD（P<0.05）；TB-Ab对肺结核的阳性预测值及诊断灵敏度均显著高于痰涂片镜检（P<0.05）；四种检测方式对于肺结核病诊断的特异度差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 四种检测方式对肺结核的诊断价值（%）

2.3 不同年龄组患者TB-IGRA、TB-Ab阳性检出率比较 高龄患者的TB-IGRA、TB-Ab阳性检出率明显低于中青年患者（P<0.05）；各组TB-IGRA的阳性检出率显著高于TB-Ab（P<0.05）。见表3。

表3 不同年龄者的TB-IGRA、TB-Ab阳性检出[n(%)]比较

3 讨论

近年来，我国肺结核的发病率呈日渐增高趋势，该病多由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）引起[10]。临床实践中多将病原学检查作为诊断结核感染的金标准，但由于我国人口普遍接种了卡介苗，该疫苗接种可影响结核感染的诊断准确性[11]。不少研究[12]也曾表明：痰涂片镜检灵敏度较低，且常出现假阴性的情况。因此，寻找诊断准确性更高的结核感染检测方法已成为了目前临床的研究热点。Divya等[13]研究发现：MTB进入机体后，可诱导产生致敏T细胞，机体再次受到CFP-10等抗原刺激后，T淋巴细胞可释放γ-干扰素等，基于此可通过检测血清中γ-干扰素含量，来判断机体MTB感染情况。TB-IGRA则是通过ELISA法，测定T细胞产生的IFN-γ水平，可有效避免卡介苗接种人群引起的干扰，具有检测迅速、灵敏度高的特点[14]。 李娜等[15]和李德新等[16]研究指出：TB-IGRA对结核疾病的诊断特异度为88.3%，对菌阳性肺结核病患者的诊断敏感度为81.9%。结核感染后，MTB可进入人体，刺激产生多种特异性抗体，TB-Ab检测可以利用微孔滤膜的可滤性，获取IgG免疫抗体，该抗体与SPA胶体缀合物反应后形成红色斑点，便于观察及操作，但有研究指出其诊断敏感性较低，易出现漏诊的情况[17]。

本研究结果显示：TB-IGRA对肺结核病变的阳性检出率明显高于TB-Ab及痰涂片镜检，与非肺结核组相比，TB-IGRA、TB-Ab对肺结核的阳性检出率有明显升高。陈玮[18]报道称，结核病患者中TB-IGRA阳性检出率90.12%。另有王琼等[19]研究指出，TB-Ab在肺结核的阳性检出率为40.03%。提示TB-IGRA、TB-Ab均能有效判断肺结核病变，但TB-IGRA的阳性检出率更高。非结核感染者检出阳性的原因可能为患者体内存在MTB抗原并与决定簇进行了特异性结合，或患者曾接种过卡介苗，现已发生钙化。本研究结果还显示，TB-IGRA对肺结核的阳性预测值及灵敏度均为90.07%，均显著高于TB-Ab及痰涂片镜检；而与痰涂片镜检相比，TB-Ab对肺结核的诊断灵敏度则有显著升高。范国萍等[20]研究报道称，痰涂片对MTB的检测灵敏度仅为33.67%，与本研究结果基本一致，提示痰涂片镜检诊断肺结核的灵敏度较差。以上说明，TBIGRA的检测符合率及灵敏度均较高，虽然无法区分引发疾病的原因及结核所在病灶，但其仍作为诊断肺结核的有效方法。

然而，TB-IGRA技术也存在一定的局限性，其在海分枝杆菌、胃分枝杆菌等5种非结核杆菌中存在相同抗原，若机体发生上述非结核杆菌感染时，TB-IGRA难以将它们与MTB感染区分开来。本研究结果显示：该检测方式在非肺结核组也均有阳性检出，且在肺结核患者的诊断中，TB-IGRA虽阳性检出率最高，但特异度与TB-Ab、痰涂片镜检、PPD比较无明显差异，分析四种检测方法特异度均不高，可能和受卡介苗和非结核分枝杆菌交叉反应影响有关。王浩等[9]研究也曾报道称，TBIGRA检测仍可发生检测假阴性的情况。提示虽然TB-IGRA可获得较高阳性检出率及灵敏度，但实际检测中仍然存在假阳性或假阴性的情况。同时TB-IGRA假阴性还可与实验环境、操作技术及各区域人种的MTB滴度不同有关，因此进行TBIGRA时需规范操作步骤，避免误诊。

本研究还发现：高龄（≥65岁）患者的TBIGRA、TB-Ab阳性检出率明显低于中青年患者，与王浩等[9]研究结果一致。分析原因可能与高龄患者机体免疫功能较中青年患者更差，而TB-IGRA、TB-Ab检测易受免疫功能影响有关。

综上所述，TB-IGRA及TB-Ab对于肺结核病的诊断效能优于传统的痰涂片及PPD方法。与TB-Ab、痰涂片、PPD相比，TB-IGRA对肺结核疾病的阳性预测值及灵敏度均较高，具有一定的应用前景。但TB-IGRA检测结果可能受到年龄、操作技术等因素的影响，可能存在特异性不高的情况，临床实践中需结合其他诊断技术综合判断肺结核感染情况。同时本研究还存在不足，如研究样本较小等，未深入研究影响TB-IGRA、TB-Ab阳性检出率的危险因素等，未来需进行大样本研究。