黄文静 陈克河

流行病学调查显示，在消化道的恶性肿瘤中，胃癌发病率占消化道恶性肿瘤的40%～50%[1]。随着人们日常生活节奏以及生活方式的改变，胃癌患者呈现年轻化趋势[2]。目前，在世界范围内，胃癌患者的发病率在恶性肿瘤中居于第二位，死亡率高达23.2%，居于恶性肿瘤死亡率的首位[3]。在对胃癌的诊断过程中，目前所已知的肿瘤标志物的诊断特异度不高，诊断效能低下。再生因子4(REG Ⅳ)主要在患者的近端胃肠道表达，在肿瘤组织以及炎性细胞中异常表达，同时参与了患者的肿瘤细胞的浸润以及转移[4]。氧调节蛋白(ORP150)是内质网较为重要的内质网对肽类物质，有研究报道显示[5]，患者的ORP150水平与胃癌的发生发展具有显著的相关性。微小核酸物质miRNA-223对于患者的肿瘤细胞的增殖以及浸润具有显著的抑制性作用[6]，本研究通过分析REG Ⅳ、ORP150与miRNA-223联合检测对胃癌的诊断价值，为临床治疗提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以我院2018年1月至2020年3月收治的126例胃癌患者作为研究对象，其中男性59例，女性67例，年龄平均为(65.44±5.31)岁，平均体重指数(24.15±1.33)kg/m2，病变部位：胃底贲门26例、胃体50例、胃窦50例，分化程度：低分化39例、中分化32例、高分化55例，TNM分期：Ⅰ期患者34例、Ⅱ期患者35例、Ⅲ期患者38例、Ⅳ期患者19例。另选我院同期体检正常者126例作为对照组。2组一般资料之间的差异不存在统计学意义，见表1。所有患者均知情同意，并经伦理委员会论证。

表1 2组患者的基础资料比较

胃癌患者纳入标准：①所有患者均符合胃癌诊断标准[7]，②所有患者的病理分期为Ⅰ～Ⅳ期；③在本次研究前，所有患者均未开展放化疗以及手术治疗；④患者的预期生存时间在3个月以上。排除标准：①严重的肝肾功能障碍患者；②合并其他肿瘤疾病患者；③消化道穿孔以及严重营养不良患者。

1.2 检测方法

所有研究对象入组后，采集肘静脉血液4 ml，3500 r/min离心15 min，采用酶联免疫法对患者的REG Ⅳ、ORP150水平进行检测，检验试剂由上海罗氏提供，操作流程严格按照说明书进行。miR-223通过实时荧光定量PCR检测表达水平。使用Trizol试剂按试剂盒说明书从患者的血细胞中提取总RNA，匀浆后依次加入trizol、氯仿、异丙醇及75%乙醇抽提样本总RNA，获取RNA后使用逆转录试剂盒中RNA保存液溶解，于-20℃保存。向总RNA中先后加入去除gDNA的DNA eraser及逆转录酶，按说明书配置成20 μl的体系，在37℃的条件下行RT-PCR 15 min，在85℃的条件下维持15 s后终止。以逆转录得到的cDNA作为模板进行qPCR反应。以GAPDH的表达量作为内参。

1.3 分析方法

1.3.1 2组REG Ⅳ、ORP150与miRNA-223水平比较 分别对观察组以及对照组的REG Ⅳ、ORP150与miRNA-223水平进行比较。

1.3.2 不同分期以及分化程度胃癌患者的REG Ⅳ、ORP150与miRNA-223水平比较 分别对不同TNM分期以及不同分化程度患者的REG Ⅳ、ORP150与miRNA-223水平比较。

1.3.3 相关性分析 采用spearman相关性分析对患者的REG Ⅳ、ORP150、miRNA-223水平与患者的分化程度以及TNM分期情况的相关性进行分析。

1.3.4 联合检测的ROC曲线分析 分别对REG Ⅳ、ORP150、miRNA-223单独及联合检测的诊断效能进行分析。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 2组REG Ⅳ、ORP150与miRNA-223水平比较

观察组REG Ⅳ、ORP150水平显著高于对照组，miRNA-223水平显著低于对照组，差异存在统计学意义(P<0.05)，详见表2。

表2 2组REG Ⅳ、ORP150与miRNA-223水平比较

2.2 不同TNM分期患者的REG Ⅳ、ORP150与miRNA-223水平比较

Ⅰ～Ⅱ期患者的REG Ⅳ、ORP150水平显著低于Ⅲ～Ⅳ期，miRNA-223水平显著高于Ⅲ～Ⅳ期患者，差异均存在统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 不同TNM分期患者的REG Ⅳ、ORP150与miRNA-223水平比较

2.3 不同分化程度患者的REG Ⅳ、ORP150与miRNA-223水平比较

不同分化程度患者的REG Ⅳ、ORP150与miRNA-223水平之间的差异之间的差异存在统计学意义(P<0.05)，经过两两比较，随着肿瘤的分化程度的进展，患者的REG Ⅳ、ORP150水平显著升高，miRNA-223水平显著降低，见表4。

表4 不同分化程度患者的REG Ⅳ、ORP150与miRNA-223水平比较

2.4 相关性分析

通过相关性分析，胃癌的进展(分化程度、TNM分期)与REG Ⅳ、ORP150呈现正相关，与miRNA-223呈现负相关，差异存在统计学意义(P<0.05)，见表5。

表5 相关性分析

2.5 胃癌联合检测的ROC曲线分析

REG Ⅳ、ORP150与miRNA-223水平联合检测对胃癌的诊断灵敏度显著高于单独检测。通过ROC曲线分析，对于胃癌的诊断而言，患者的REG Ⅳ、ORP150与miRNA-223水平的临界值分别为6.11 ng/mL，10.52 ng/mL以及4.77 fmoL/L，见表6以及图1。

图1 胃癌联合检测的ROC曲线分析

表6 胃癌联合检测分析

3 讨论

胃癌是临床常见的消化道肿瘤疾病之一，有研究报道指出[8]，随着生活方式的不断变化，胃癌的发生率呈现逐年上升趋势，同时，胃癌患者病死率较高。在临床治疗中，由于消化道肿瘤通常较为隐匿，当患者被确诊为胃癌时，多数已经发展为中晚期，严重影响患者的生命安全以及生命质量[9]。所以，在临床上，早期对患者的疾病进行诊断，早期开展干预性治疗，对于患者的预后具有积极的意义。

本研究中，观察组患者的REG Ⅳ、ORP150显著高于对照组，miRNA-223水平显著低于对照组，且随着胃癌患者的疾病分化程度进展以及TNM分期的升高，患者的REG Ⅳ、ORP150水平显著升高，miRNA-223水平显著降低。分析认为，ORP150主要在患者的肿瘤细胞中呈现较高的表达，有研究报道指出[10]，患者的ORP150与患者的肿瘤细胞的凋亡显著相关，在肿瘤细胞的无序生长过程中，患者的局部组织处于缺糖、酸中毒以及严重的缺氧状态，通过对患者的CHOP的显著性表达调控，进而影响患者的内质网的正常折叠作用，进一步造成局部组织的癌变[11]。彭浩等[12]通过对胃癌患者的ORP150表达水平的分析发现，随着患者的疾病进展，患者的ORP150显著升高，与本研究相互印证。在对患者的诊断过程中，REG Ⅳ主要在患者的胃肠道以及胰腺组织中进行分泌性蛋白，在患者的REG Ⅳ的表达过程中，其显著的表达产物可以显著促进患者的细胞的增殖，进一步加剧患者的胃癌的进展，在对患者的胃癌的REG Ⅳ表达中，29.4%的胃癌患者可表现为显著的REG Ⅳ阳性[13]。但是仅仅依靠REGⅣ对胃癌进行诊断尚缺乏准确性。黄容旺等通过对胃癌患者的REG Ⅳ水平的分析发现，随着患者的胃癌的进展，患者的REG Ⅳ显著升高，与本研究相互印证[14]。

最近的研究发现，微小核酸物质在胃癌患者的进展中发挥重要作用。有研究报道指出，微小核酸物质主要存在于真核细胞中，大量的研究证实，血液中的miRNA-223可作为患者的肿瘤标志物，在胃癌的疾病进展中，miRNA-223主要通过对患者的FBXW7hCdc4的显著性抑制性作用，进而对肿瘤细胞的进展发挥作用。王静等通过对胃癌患者的miRNA-223水平分析发现，随着患者的疾病进展，患者的miRNA-223水平显著降低，与本研究相互印证[15]。

另外，通过对患者的ROC曲线分析，对于胃癌患者的诊断而言，患者的REG Ⅳ、ORP150与miRNA-223水平的临界值分别为6.11 ng/mL，10.52 ng/mL以及4.77 fmoL/L，以上数值可作为临床诊断胃癌的重要依据，同时在对患者的治疗中，以上数据可作为患者治疗效果评价的重要依据。

综上所述，REG Ⅳ、ORP150与miRNA-223联合检测对胃癌的诊断具有重要意义。