方 黎 李 伟

肺癌具体发病机制尚未完全揭示，早期患者病情较轻，无明显症状，甚至可能未表现出任何不适感，因而在确诊时多已发展至晚期[1]，因此临床中及时评估和预测患者病情变化具有十分重要的意义[2]。细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1，human cytokeratin fragment antigen 21-1)是近年发现的肺癌诊断标志物，存在于单层及复层上皮肿瘤细胞介质中，CYFRA21-1可参与恶性肿瘤增殖、分化、浸润及迁移过程。胃泌素释放肽前体(ProGRP，pro-gastrin releasing peptide)属于脑肠激素，ProGRP表达异常与恶性肿瘤的发生、发展有密切的关系。金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1，tissue inhibitor of metalloproteinase-1)与肺癌的发生与发展有密切的相关性[3-4]，但其表达水平与患者预后及病理特征的关系仍鲜有报道。本研究探讨了患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP表达水平与肺癌病理特征的关系，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院于2018年1月至2020年5月间收治的75例肺癌患者作为观察组。男性患者39例、女性患者36例，平均年龄(53.47±6.18)岁，其中<45岁的患者19例、45～60岁的患者26例、>60岁的患者30例；无吸烟史33例、有吸烟史42例；病理类型：非小细胞肺癌41例、小细胞肺癌34例；肿瘤的分化程度：高分化25例、中分化21例、低分化29例；TNM分期：Ⅳ期28例、Ⅲ期21例、Ⅱ+Ⅰ期26例；肿瘤大小≤3 cm 40例、肿瘤大小≥3 cm 35例；淋巴结无转移34例、淋巴结转移41例；无远处转移45例、远处转移30例。参与本组研究的患者均符合如下条件：①经影像学和病理组织学检测确诊为肺癌；②保存有完整影像学资料；③入组前未接受任何治疗；④无急性或慢性感染；⑤无其他系统严重疾病；⑥患者及其家属对本研究知情并签署知情同意书。另外选取50例同时期存在肺部病变的非肺癌患者作为对照组，其中男性26例、女性24例，平均年龄(54.82±6.43)岁。对照组纳入标准：①无肿瘤相关疾病；②病理检测确诊为非肺癌；③患者及其家属对本研究知情并签署知情同意书。若患者符合如下任一指标则将其排除出本研究：①未接受病理学检查；②患者无法接受定期随访；③患者存在肝硬化、甲状腺疾病；④存在其他部位原发肿瘤患者；⑤胚胎性肿瘤患者；⑥主动申请退出本研究。2组受试者性别、年龄一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，分组合理，具有可比性。本研究经我院伦理委员会审议并批准。

1.2 检测方法

采集所有受试者空腹静脉血3 mL置于肝素抗凝管中，静置30～60 min，于离心机中3000 r/min离心10 min，收集上清液，即为患者的血清样本。采用微粒子化学发光法检测患者血清中CYFRA21-1及ProGRP水平，仪器为罗氏化学发光检测仪，配套试剂盒购自罗氏检测公司；采用酶联免疫吸附法检测患者血清中TIMP-1水平，仪器为雅培化学发光检测仪，所用试剂盒购自南京晶美生物科技有限公司。所有试剂操作均遵照试剂盒说明书的操作步骤进行。

1.3 评价指标

观察2组研究对象的CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平的差异，分析不同特征肺癌患者CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平的差异，进一步分析影响肺癌患者CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平的因素。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 2组患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平

观察组患者的血清中CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP表达水平均明显高于对照组，且差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平

2.2 肺癌患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1与ProGRP水平与临床病理特征的关系

观察组患者中不同性别、不同年龄阶段及有无吸烟史患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1与ProGRP表达水平比较均无明显差异(P>0.05)；不同病理类型、病理分化程度及肿瘤大小患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1与ProGRP水平无明显差异(P>0.05)，TNM分期Ⅰ+Ⅱ期患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1与ProGRP水平显著低于TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者(P<0.05)，有淋巴结转移及远处转移患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1与ProGRP水平显著高于无淋巴结转移和无远处转移患者(P<0.05)，见表2。

表2 患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1与ProGRP水平与临床特征关系

2.3 影响肺癌患者CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平的因素分析

以TNM分期、有无淋巴结转移及远处转移作为自变量，以患者CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平作为因变量，进行多因素Logistic回归分析，结果显示TNM分期、有无淋巴结转移及远处转移为其影响因素，见表3。

表3 影响肺癌患者CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平的因素分析

3 讨论

肺癌是临床中较为常见的且死亡率居高不下的恶性肿瘤之一，因其发病率和死亡率不断升高，已对人类的生命健康安全造成严重威胁[5]。肺癌患者的无瘤生存时间不足38个月，手术及相关综合性治疗措施治疗后，肺癌患者在3年内的死亡率高于35%[6]。因肺癌的病情进展较快，临床上认为，对肺癌的早发现、早诊断、早治疗可以极大地提高肺癌的治疗有效率，因此，肺癌的诊断研究一直是肿瘤研究领域的热点之一。目前，临床中常采用X线片、CT、纤维支气管镜、支气管造影及细胞学检查等手段对肺癌患者进行诊断检查，在确诊的患者中有80%已属中晚期，因此患者失去手术的最佳时机。这些肺癌检查手段具有一定的局限性，且目前尚缺乏特异性检测与预测指标，另外，对阳性患者再次进行细胞学和病理学检测的依从性较低，因此肺癌的确诊率一直很低，多数患者在确诊时多已发展至中晚期并伴随局部侵袭与远处转移。如果肺癌患者在Ⅰ期能够被确诊，并进行恰当的治疗，那么5年内的生存率可以提高至90%以上[7]。因此，加强患者血清肿瘤标志物检测对肺癌患者的初期诊断、治疗及预后均具有重要的临床意义。

随着生物学的发展，肿瘤标志物检测在肺癌初期诊断和治疗中已取得重大进展，其便捷、无创、经济及准确性受到临床医生的重视，已成为肺癌患者诊断与治疗的重要方法和途径。通常情况下，肿瘤标志物价值主要取决于其特异性及敏感性[8]。目前临床上常用的肺癌血清肿瘤标志物主要包括癌胚抗原(CEA)、Cyfra21-1、鳞状细胞癌抗原(SCCA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、ProGRP、癌抗原125、糖链抗原19-9、肿瘤特异性生长因子等。单一肿瘤标志物诊断肺癌存在一定局限性，肿瘤标志物联合检测诊断肺癌成为近年来的研究热点。

Cyfra21-1是人体内细胞角蛋白19的两个可溶性片段之一，是构成细胞骨架中的一种间丝状物质，其分子量约为30 kD，当细胞发生癌变时，细胞角蛋白(Cytokeratin，CK)可刺激Cyfra21-1释放，参与癌细胞的增殖和转移，从而导致血清中Cyfra21-1含量升高[9]。有研究指出，细胞角蛋白19在包括层状、鳞状上皮细胞等诸多正常组织中均广泛存在[10]。本组研究结果显示，肺癌组患者血中CYFRA21-1水平明显升高且高于对照组，在肺癌、食管癌等上皮来源的肿瘤细胞胞质中，蛋白酶激活后加速了细胞角蛋白的降解，使其以片段的形式释放于血清中，对肺癌的诊断及预后评估具有十分重要的意义。胃泌素释放肽(gastrin-releasing peptide，GRP)是从胃组织中分离出的一种类似蛙皮素(Bombesin)羧基末端的肽类物质，因其在血液中含量稳定而成为新型肿瘤标志物[11]。但GRP在血清中半衰期较短，临床中多难以有效及时进行检测诊断。有学者指出，肺癌细胞可以合成并分泌ProGRP，而ProGRP可通过旁分泌及细胞间相互作用促进肿瘤分化增殖，加速病灶转移，通过测量血清中ProGRP可有效反映肺癌的发生及发展[12]。本组研究结果显示，肺癌组患者血中TIMP-1及ProGRP水平均明显升高，且高于对照组。该结果提示TIMP-1及ProGRP均参与肺癌的进展过程，TIMP-1及ProGRP可能是肺癌的肿瘤标志物。有研究报道，ProGRP在正常人群中含量很低，血清总ProGRP浓度上限为50 pg/ml，然而在肺癌患者血清中ProGRP水平显著升高，且高于正常人群及肺部良性病变组[13]。ProGRP是GRP重要的前体结构，在神经纤维、肺组织及非胃窦组织中均有合成及分泌，且ProGRP在血清中稳定性较高。

本组研究结果提示CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP均参与肺癌的进展过程，CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP可能是肺癌的肿瘤标志物。结合相关文献分析认为，CYFRA21-1是细胞骨架的重要成分，其表达水平的升高能导致肺癌细胞侵袭能力的上升，促进其对于邻近正常肺泡上皮组织的浸润；TIMP-1表达水平的升高则会促进肺癌细胞的浸润和转移；ProGRP表达水平的升高能够诱导癌细胞变形能力的改变，促进癌细胞的转移。肺癌组患者中不同年龄、性别及吸烟史患者血中CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平无明显差异，表明CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP与患者的年龄、性别及吸烟史无关。进一步对不同病理特征患者血中CYFRA21-1、TIMP-1与ProGRP水平分析发现，TNM分期Ⅰ+Ⅱ期患者血中CYFRA21-1、TIMP-1与ProGRP水平低于TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者，有淋巴结转移及远处转移患者血中CYFRA21-1、TIMP-1与ProGRP水平高于无淋巴结转移和无远处转移患者。分析认为，CYFRA21-1、TIMP-1与ProGRP的表达均与浸润程度、临床分期、淋巴结转移有关，随着患者病情加重，患者体内肿瘤细胞增殖及转移强度增高，且患者细胞外基底膜分解能力增强，进而导致其水平异常增高，因而CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP可以用作肺癌的筛查肿瘤标志物，与文献报告结果一致[14]。然而，CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP的表达水平与肺癌的病理类型、分化程度及肿瘤体积无关。

综上所述，在肺癌患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP表达水平明显上升，同时CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平的上升与肺癌患者淋巴结转移、TNM分期及远处转移等临床病理特征密切相关，但本研究为单中心研究且临床样本数较少，有待后续深入研究。