劳基通 邝希 刘惠 肖敏 陈永敏 廖小平 马琳 李其富

癫痫是一种常见的中枢神经系统慢性疾病[1]，尤以颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy，TLE)最常见，其多与海马体区域的病变有关[2]。既往研究表明细胞外基质(extracellular matrix，ECM)和整合素受体在癫痫发生发展的过程中起重要作用[3-4]。分泌型酸性富含半胱氨酸样蛋白1型(secreted protein acidic and rich in cysteine1，SPARCL1)也称Hevin，是一种由星形胶质细胞分泌的突触蛋白，参与突触重塑过程[5]。既往研究表明，SPARCL1在癫痫发作后表达明显降低[6]。作为细胞外基质蛋白受体的膜蛋白整合素β1(Integrinβ1)也被证实，敲除Integrinβ1基因后能诱发癫痫持续状态(status epilepticus，SE)。然而，SPARCL1和Integrinβ1在癫痫发生发展过程中的具体分子机制尚未明确，因此本研究拟通过RT-qPCR和Western Blot方法检测SE后第1周内海马及邻近颞叶的皮层中SPARCL1和Integrinβ1的mRNA及蛋白水平表达变化，初步探讨两者在癫痫发生发展过程中的可能机制。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1实验动物：选用鼠龄21 d雄性SD大鼠共56只，体重为60～80 g，购买于长沙市天勤生物技术有限公司，于室温20～25℃、湿度50%～70%SPF级环境饲养，每笼5只，12 h光照，自由进食和进水。

1.1.2主要试剂和仪器：硫酸阿托品(上海禾丰制药有限公司)和氯化锂-匹罗卡品(LiCl-PILO；购于美国Sigma公司)。兔抗SPARCL1抗体、兔抗Integrinβ1抗体、兔抗GAPDH抗体(内参抗体)、山羊抗兔IgG抗体(HRP)均购于中国博奥森生物有限公司。BCA蛋白质定量试剂盒购于中国Beyotime公司。TRIzol Reagent(Life)，HiScript Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)、ChamQ SYBR qPCR Master Mix(中国诺唯赞生物科技股份有限公司)，β-Actin基因作为内参基因，引物均由华大基因公司合成。SDS-PAGE蛋白电泳仪、转膜仪(美国Bio-Rad公司)，凝胶成像仪(中国天能公司)，荧光定量PCR仪MX3005P(中国安捷伦科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1LiCl-PILO急性大鼠模型的建立：56只大鼠随机分为致痫组(35只)和对照组(21只)。……