王 建，孙 彤，孙竹筠，苏 苌，陈鸿军，陈丹清

（1.江苏省常州市武进区畜牧兽医中心，常州 213161；2.中国农业科学院上海兽医研究所动物疫病诊断中心，上海 200241）

禽白血病（Avian leukosis,AL）是由禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）引起的禽类多种肿瘤性疾病的统称，属反转录病毒科，甲型反转录病毒属，分为A-J 10个亚群。其中，鸡易感的亚群主要有A、B、C、D、E、J和K亚群[1]，A、B、J亚群是鸡群中最常见也是危害最严重的ALV病毒亚群，均属于外源性病毒，以垂直传播为主[2]，使禽白血病的感染呈持续性和延续性，也可以在鸡群间水平传播使病毒迅速扩散。ALV-J能够引起一种以免疫抑制、生长抑制和髓细胞癌变为特点的传染性骨髓细胞瘤疾病或髓细胞白血病[3]；ALV-A/B可引起淋巴细胞白血病。AL目前尚无有效疫苗及特效治疗药物，防治困难，主要通过对鸡群进行筛选，淘汰阳性鸡，从而达到种群净化的目的[4]。筛选通常采用病毒分离和对p27抗原的检测，p27蛋白为ALV的核衣壳蛋白、群特异性抗原，占病毒蛋白的含量最高，且高度保守，含多种抗原位点，是检测ALV的主要靶点。

中国鸡群中普遍存在ALV感染，其中J亚群的ALV感染率最高，在蛋鸡、纯地方品系鸡中感染率均较高。近年来ALV在我国广泛分布，且趋势逐渐上升，给我国带来巨大的经济损失。随着近年来中国对种鸡场AL净化工作的开展及加强，对AL的控制已取得一定的成效，但仍有部分地区存在流行情况，因此仍需对各类鸡场中AL进行监测。

为了解江苏常州地区商品肉鸡中AL流行与净化情况，本文采用商品化禽白血病A/B亚群、J亚群血清抗体和p27抗原ELISA检测试剂盒，对该地区2019年7—12月、2020年1—4月的1257份肉鸡血清样品进行检测，为AL的净化防控提供一定数据支撑。

1 材料与方法

1.1 样品采集 2019年7—12月、2020年1—4月无菌采集江苏常州地区两个镇不同养殖户共1257份商品肉鸡全血（每户养殖场随机采样10～15份），3000 rpm离心5 min，离心后取血清于1.5 mL离心管中，-20℃保存待检。

1.2 样品检测 按照商品化酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒说明，对样品血清中ALV-J、ALV-A/B抗体、p27抗原进行检测。

1.3 数据分析 按照试剂盒说明书提供的判定方式进行结果判定。利用统计软件SPSS19.0、GraphPad Prism 6.01进行数据统计分析。

2 结果与讨论

2.1 送检样品ALV总阳性率 在受检的1257份鸡血清样品中，ALV总阳性率为18.14%，其中ALV-J血清抗体阳性率为5.01%；ALV-A/B血清抗体阳性率为13.13%（表1），表明ALV在江苏常州地区肉鸡中的感染较为普遍，且以ALV-A/B为主。刘胜宇等[6]2012—2013年对江苏徐州地区的禽白血病流行病学的调查结果中，ALV-A/B抗体阳性率约为10%，张媛等[7]2013年对该地区ALV-J的流行病学调查报告结果显示：ALV-J抗体阳性率为11.8%～22.2%，表明近年来江苏地区AL流行一直存在，ALV-A/B抗体阳性率（13.13%）变化不明显，但ALV-J（5.01%）相比以往有所下降。张倩等[8]调查发现国内自培育种鸡感染ALV-A/B的风险较高，ALV-A/B抗体检出率高于ALV-J，与本次调查结果相同，经典ALV-A/B感染长期存在，提示有必要进一步加强对ALV-A/B的防控。

表1 不同镇ALV抗体检测结果Table 1 Test results of ALV antibodies in different towns

2.2 不同镇区ALV抗体检测结果 受调查的两个镇中，牛塘镇的ALV-A/B的抗体阳性率为8.04%，ALV-J抗体阳性率为0.47%，总阳性率为8.51%。嘉泽镇ALV-A/B抗体阳性率为15.71%，ALV-J抗体阳性率为7.31%，总阳性率为23.02%。可以看出嘉泽镇肉鸡个体总体ALV抗体阳性率均高于牛塘镇（图1），这可能与嘉泽镇采样量较牛塘镇多有关，但不排除嘉泽镇养殖场数量多，密度较大，各养殖场间存在水平传播导致交叉感染的原因。提示养殖场需要保持完善卫生，隔离及生物安全的制度，采取“全进全出”的饲养原则。对于出入场区的车辆及人员进行严格消毒，防止人为的水平传播，并及时对鸡粪及死鸡进行无害化处理，切断可能的传染源。

图1 不同镇区ALV抗体阳性率对比Fig.1 Comparison of ALV antibody positive rates in different towns

2.3 不同月份ALV抗体检测结果 2019年7-12月，2020年1-4月个体ALV抗体阳性率呈现一定的季节性特征。个体ALV-A/B、ALV-J抗体阳性率在各月变化趋势相近，2019年7-12月中，11月为个体ALV-J阳性率高峰，ALV-A/B抗体阳性率高峰则在8月。2020年1-4月ALV-A/B、ALV-J抗体阳性率趋势相近，均呈现上升趋势（图2），ALV-A/B整体阳性率高于ALV-J。1、2月均未出现ALV-J抗体阳性，3月未进行样品采集，4月阳性率升高为14.29%；ALV-A/B从2月起就出现较高个体抗体阳性率，到4月进一步升高达到33.58%（表2）。10月、1月由于样本量较小，ALV抗体阳性率较低或未检出。推测不同月的个体ALV抗体阳性率差异与鸡ALV高发日龄有关，禽白血病在8～35周、19～30周多发，因此判断该地区8月、11月、4月商品鸡日龄正是禽白血病高发日龄，因此抗体阳性率较高，提示针对不同日龄鸡进行防控的必要。

图2 2019年7-12月 （A）、2020年1-4月 （A） ALV-J、ALV-AB抗体阳性率变化趋势Fig.2 Trends in the positive rate of ALV-J and ALV-AB antibodies from July to December 2019 （A） and January to April 2020 （B）

表2 2019年7-12月、2020年1-4月ALV抗体检测结果Table 2 ALV antibody test results from July to December 2019 and January to April 2020

2.4 ALV-J、ALV-AB混合感染情况 在本次ALV抗体检测中出现样本既呈ALV-J抗体阳性，又呈现ALV-A/B抗体阳性的个体，表明该地区存在两个亚群的混合感染情况；其中嘉泽镇的混合感染率为12.5%高于牛塘镇的5.56%（表3）。从时间上看，混合感染主要集中在2019年8月、11月及2020年4月，4月混合感染率最高，为12.14%，与各月ALV抗体阳性率高峰时间重合，表明在ALV感染的高峰期，易导致ALV亚群间的混合感染发生。刘功振等[13]从感染ALV-J的蛋鸡群中分离到了ALV-B，与本次调查中情况相似，表明混合感染在ALV中是普遍存在的。混合感染会进一步加大监测及防控难度，使商品肉鸡面临更大风险，应对感染情况尽早进行净化和控制措施。

表3 不同月ALV抗体阳性混合率Table 3 The positive mixing rate of ALV antibodies in different months

2.5 ALV-p27抗原检出情况 挑选ALV-A/B和ALV-J抗体阳性的样品进行禽白血病p27抗原检测。p27抗原是ALV群内所有病毒的群特异性抗原，检测P27抗原可表明鸡是否处于带毒状态，但对血清中p27抗原的检测可判断鸡是否存在内源性ALV病毒的干扰，内源性和外源性病毒感染是ALV感染的特点[14]，通常内源性ALV病毒整合在鸡的基因组中随遗传传递给下一代，一般不会形成感染型的病毒颗粒，外源性ALV病毒基因组能够形成有感染性的病毒颗粒，垂直或水平传播造成感染[15]。在本次检出ALV-J、ALV-A/B抗体阳性的个体中，有54.39%的p27抗原阳性检出率（图4），表明鸡群存在带毒状态，可能通过排毒成为一个群体中的传染源。结合外源性ALV病毒ALV-J、ALV-A/B的抗体阳性情况，可将该个体淘汰，防止进一步传播的发生。

表4 禽白血病p27抗原检测结果Table 4 Test results of avian leukemia p27 antigen