赵文镇 林宇宁

1福建省厦门医学院，厦门 361023；2福建医科大学附属厦门弘爱医院医学检验中心，厦门 361009

结直肠癌包括结肠腺癌和直肠腺癌。结直肠癌的发病率排名第3（占总病例的10.2%），是全世界癌症相关死亡的第2 大原因（占所有病例的9.2%）［1］。在过去几十年中，全球结直肠癌的发病率和病死率稳步下降；然而，结直肠癌仍然是最常见的胃肠道恶性肿瘤和第2 大癌症相关疾病的死亡原因［2］。目前，结直肠癌的唯一治疗方法是手术切除，而化疗只能维持一定的生存率［3］。化疗和手术切除治疗恶性结直肠癌的手段正在增加，但这些治疗的效果没有明显改善。大约一半的结直肠癌复发，患者在5 年内死亡［3-4］。结肠腺癌被认为是由遗传和表观遗传变化引起的，这些变化启动了癌症的发展并促进了癌症的进展。癌基因作为肿瘤治疗的靶点，促进肿瘤细胞的生长和转移，已被广泛认识［5］。生物标志物可作为预后指标、分子预测因子和靶向治疗的决定因素［6-7］。许多预后标志物已在结直肠癌中被评估。然而，大多数是实验性的，或者不是前瞻性的验证［8］。

lncRNAs 是≥长度为200 个核苷酸，调节一系列细胞生物学过程，包括染色质重塑、转录和转录后调节［9］。lncRNAs 最为公认的分子机制是充当miRNA“海绵”来调节下游靶基因［10］。lncRNAs 在各种类型的癌细胞中异常表达，并在几种常见的癌症标志物中发挥重要作用［11］。

本研究旨在寻找和结直肠癌发展进程相关的lncRNAs，研究其作为结直肠癌患者诊断和预后的新型生物标志物的可能性。

资料与方法

1、RNA测序数据与生物信息学分析

笔者从癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas，TCGA）数据库（https：//portal.gdc.cancer.gov/）下载2020 年4月7日发布的V23.0版本的结直肠癌患者基因表达谱数据中698 例level 3 HTSeq-FPKM 格式的RNAseq 数据和临床信息，包括50 例配对的结直肠癌旁正常组织。然后将FPKM 格式的数据转换为TPM 格式用于后续分析。笔者还在TCGA 和基因型组织表达（Genotype Tissue Expression，GTEx）数 据 库（https：//xenabrowser.net/datapages/）中 下 载TPM 格式的RNA 序列数据，该数据库由UCSC Xena 的Toil过程统一处理［12］。本研究中执行的所有程序均符合《赫尔辛基宣言》（2013年修订）。

2、统计学分析

所有统计分析均采用R（v.3.6.3）进行。不同组织中的LINC01836 表达的差异采用Wilcoxon 秩和检验，临床病理特征与LINC01836之间的关系采用卡方检验、Fisher精确检验和logistic 回归分析。采用Kaplan-Meier 方法计算TCGA中的结直肠癌患者的总生存率。P＜0.05 差异有统计学意义。

结 果

1、LINC01836在结直肠癌组织中高表达

为了确定结直肠癌和正常组织中LINC01836 表达的差异，笔者分析了698 个结直肠癌组织和51 个癌旁正常组织中LINC01836 的表达水平，发现LINC01836 在结直肠癌组织 中高表达（P＜0.001，图1A）。同时，笔者还 分 析 了LINC01836在50例结直肠癌组织及其配对癌旁正常组织中的表达情况，结果同样表明结直肠癌组织高表达LINC01836（P＜0.001，图1B）。 此 外，笔 者 还 比 较 了TCGA_GTEx 中383 例TCGA 结直肠癌样本和359 例对应的正常结直肠组织LINC01836 的表达，结果表明LINC01836 在结直肠癌组织样本中显著高表达（P＜0.001，图1C）。

图1 LINC01836在结直肠癌组织、癌旁正常组织、正常组织中的差异表达。A：TCGA中LINC01836在结直肠癌组织和癌旁正常组织中的差异表达。B：TCGA 中LINC01836在结直肠癌组织和其配对癌旁正常组织的差异表达。C：TCGA_GTEx中LINC01836在结直肠癌组织和正常结直肠组织中的差异表达

2、LINC01836的诊断价值

使用ROC分析LINC01836表达水平对区分结直肠癌组织和非癌组织的有效性，结果显示LINC01836 的曲线下面积（area under curve，AUC）为0.907（图2A）。TCGA_GTEx中，纳入了正常组织数据后分析，AUC 为0.899，表明LINC01836 可作为区分结直肠癌与正常组织的理想生物标志物（图2B）。

图2 ROC 分析LINC01836对结直肠癌的诊断价值。A：ROC 显示TCGA 中LINC01836 表达水平对区分结直肠癌组织和癌旁正常组织的有效性。B：ROC 显示TCGA_GTEx 中LINC01836 表达水平对区分结直肠癌组织和正常结直肠组织的有效性

3、LINC01836与结直肠癌患者临床特征的关系

患者临床特征如表1所示，筛选得到644例同时具有临床特征和基因表达数据，根据LINC01836 表达的中位数值，将结直肠癌患者分为高（322 例）和低（322 例）表达组。通过卡方检验或Fisher检验，结果显示LINC01836表达在不同的N 分期、M 分期、病理分期、淋巴侵犯和结肠息肉差异均有统计学意义（均P＜0.05）。同时logistic 回归分析结果表明：高表 达 的LINC01836 与N 分 期进 展（OR=1.469，P=0.017）、M 分期进展（OR=2.131，P=0.002）、病理分期进展（OR=1.580，P=0.005）、淋巴侵犯（OR=1.826，P＜0.001）、结肠息肉相关（OR=0.576，P=0.025），见表2。

表1 LINC01836表达与结直肠癌的临床病理特征的相关性

表2 LINC01836表达与临床病理特征相关性分析（logistic回归）

4、LINC01836表达与结直肠癌患者预后不良相关

根据中值将LINC01836 表达值分为高表达组和低表达组。通过Kaplan-Meier 生存分析评估LINC01836 表达与结直肠癌患者总体生存率之间的相关性，结果表明LINC01836 高表达与结直肠癌患者总体生存率低相关（P=0.002）（图3）。

图3 Kaplan-Meier 生存分析评估LINC01836 对结直肠癌患者的预后价值

讨 论

lncRNAs 在不同的基因表达水平发挥调节功能，包括染色质修饰、转录和转录后［13］。lncRNAs 可与染色质重塑复合物相互作用，在特定基因组位点诱导异染色质形成并降低基因表达。此外，lncRNAs 与RNA 结合蛋白和转录因子共激活剂相互作用，或通过调节其靶基因的主要启动子来调节转录。作用机制方面，lncRNAs 可以与DNA、mRNAs、ncRNAs 和蛋白质进行通信，并发挥与癌症相关的调节作用，如成为通信信号、诱导信号传递、协助基因转移、成为信号传递支架和信号传递向导等［14-15］。此外，lncRNAs通常参与大肠癌的不同阶段，从癌前息肉到远处转移，这可以被视为潜在的有效诊断生物标志物［16-17］。

目前，结直肠癌的主要治疗方法是手术切除，化疗只能维持一定的生存率。有研究通过改变手术方式来改善结直肠癌的治疗效果，如张锐江等［18］研究指出，腹腔镜结直肠癌根治术的治疗对患者胃肠功能恢复、减少出血量有帮助。免疫检查点抑制剂（immune checkpoint inhibitors，ICI）也是结直肠癌的治疗手段之一，目前研究较多，疗效较好［19］。

LINC01836是一种新的lncRNAs，目前研究较少。本研究主要发现了LINC01836 在结直肠癌组织中的表达量高于邻近非癌组织，与此同时，LINC01836 在结直肠癌组织中的表达也高于正常人群的结直肠组织，并初步证明LINC01836 具有一定的结直肠癌诊断价值。本研究还综合分析了LINC01836 的表达与结直肠癌患者的临床病理特征，发现LINC01836 与结直肠癌的N 分期进展、M 分期进展、病理分期进展、淋巴侵犯和结肠息肉相关。通过Kaplan-Meier 生存分析发现，在结直肠癌组织中，高表达的LINC01836 与患者预后较差相关，因此LINC01836 还存在一定的预后价值。

综上所述，LINC01836 是一个新的lncRNAs，目前研究较少。本研究发现在结直肠癌组织中的高表达LINC01836 对结直肠癌的诊断和预后评价有一定的价值。但本研究也存在一定的不足之处，在本研究中，并未将LINC01836 的表达与肿瘤免疫微环境进行聚类分析，因此，LINC01836 是否有望成为免疫抑制剂治疗结直肠癌新的靶点仍需讨论，在后续的研究中，可以针对LINC01836 与免疫细胞的关系设计实验并加以验证。