黄锦 加加林 姚雅馨 陆思嘉 党玉姣 乔杰 刘平

近年来胚胎培养液中存在游离DNA(cell free DNA，cfDNA)已经在生殖领域引起了越来越多的关注[1]。有学者利用囊胚培养液中cfDNA检测囊胚的整倍性[2-3]。由于胚胎培养液中游离DNA来源复杂而且含量极少，这给检测胚胎整倍性的准确性带来困难，也限制了在临床上的广泛应用。本文以囊胚培养液cfDNA检测重要染色体(13、15、16、18、21、22号染色体)整倍性为切入点，探讨利用cfDNA检测囊胚整倍性的效率。

材料与方法

一、材料

本研究共纳入239枚囊胚，所有的胚胎均来源于北京大学第三医院生殖中心的胚胎植入前遗传学筛查(preimplantation genetic testing for aneuploidy PGT-A)周期。PGT-A指征为女方高龄(>38岁)、复发性流产、反复着床失败。本研究获得北京大学第三医院医学伦理委员会批准，所有患者均在进入周期前签署知情同意书。

二、研究方法

1.促排卵和受精方式：按照本中心常规用药及监测方案进行控制性超排卵，注射HCG后36 h经阴道B超引导下卵泡穿刺取卵。所有周期都采用单精子卵母细胞内注射(intracytoplasmic sperm injection，ICSI)方式受精。受精后16 h～18 h观察受精情况，第三天选择4细胞以上、碎片<50%的胚胎(多PN来源胚胎除外)进行囊胚培养，第三天或者第四天进行单胚胎单培养滴培养，每个培养滴大约20 uL左右。

2. PGT-A胚胎活检与遗传诊断：选择4期以上、滋养层细胞或者内细胞团其中一项评级为B以上的囊胚(Gardner评分标准[4])进行活检，激光活检3～5个滋养层细胞。活检的滋养层细胞采用SNP芯片检测胚胎的整倍性进行遗传检测，SNP array 芯片采用ILLUMINA公司的Human CytoSNP 12V-2.1芯片，活检后的细胞采用多重置换扩增(multiple displacement amplification, MDA)方法全基因组扩增后，杂交至芯片，扫描后的数据采用Illumina Genome Studio软件分析[5]。活检后的囊胚进行玻璃化冷冻。