鲁燕，陈永权

(皖南医学院第一附属医院麻醉科，安徽 芜湖 241000)

慢性疼痛定义为“一种不愉快的感觉和情绪上的感受,伴有或潜在的组织损伤”，疼痛如果持续3～6个月以上则称为慢性疼痛,慢性疼痛常伴有心理或精神改变甚至功能障碍，但其具体机制不明。研究发现[1]，神经病理性疼痛导致海马突触结构和功能受损是认知障碍的重要病理基础。而血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C)在调控神经干细胞分化、轴突发育等方面发挥着重要功能。VEGF-C的主要分布在星形胶质细胞上，在神经损伤大鼠模型中其在大鼠海马组织中常呈低表达[2]。

本研究通过大鼠在体实验，构建慢性疼痛认知功能障碍模型，检测慢性疼痛所致认知功能障碍时大鼠VEGF-C分泌情况，同时检测GFAP、Nestin、NeuN的表达情况。体外干预星形胶质细胞中VEGF-C的分泌水平，检测其对共培养神经干细胞的分化以及轴突发育的影响，同时检测共培养体系GFAP、Nestin、NeuN的表达水平，旨在通过体外体内实验深入阐述VEGF-C在介导慢性疼痛认知功能障碍发生发展过程中的作用，为慢性疼痛认知功能障碍的临床诊断和治疗应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

BCA试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)，兔抗GFAP、兔抗Nestin、兔抗NeuN 一抗(均为美国LSBio)，通用型二抗试剂盒(上海博蕴生物科技有限公司)，离心机( JW3021HR，安徽嘉文仪器装备有限公司)，酶标仪(美谷分子仪器有限公司)，倒置显微镜(德国徕卡公司)，电子显微镜(日本Hitachi公司)，SM2010R型切片机(德国徕卡公司)，FACSVantage SE分选型流式细胞仪(美国BD公司)，引物由上海桑贡合成生物工程技术服务有限公司(中国上海)制作及合成，重组载体和病毒包装质粒购自爱康得生物科技有限公司(中国苏州)。……