董俊强，裴美娟，黄生炫，李学文，滕 川

脑胶质瘤是一种中枢神经系统起源的最常见的恶性肿瘤，占颅内肿瘤的40%～50%，因其进展快、预后差，手术切除、放疗及化疗效果均欠佳，一直是困扰人类健康的难题[1,2]。胶质瘤高侵袭性的特点，是导致传统治疗方案失败的主要原因[3]，因此，探究胶质瘤侵袭潜在的机制是当前研究的热点。随着近些年对脑胶质瘤的深入研究，越来越多的脑胶质瘤靶点和生物标志物被发现[4]。最近环指蛋白187(ring finger protein 187，RNF187)进入研究人员的视野并证实，RNF187是一个含RING域的E3泛素连接酶，在肝细胞癌和非小细胞肺癌中过表达，并通过诱导肿瘤细胞上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition，EMT)促进了肿瘤的发展[5,6]。然而，RNF187在胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭中所起的作用，至今仍然没有研究清楚。本研究试图探究RNF187对胶质瘤细胞恶性度的影响及其可能机制。

1 材料与方法

1.1 主要材料 人脑胶质瘤细胞系U87购自上海中科院细胞库。RNF187过表达腺病毒表达载体AAVrh.10 RNF187与腺病毒衣壳AAVrh.10 Negative购自云舟生物科技(广州)有限公司。 蛋白抗体RNF187、NLRP3、ASC、GSDMD及GSDME购自美国abcam公司，CCK-8、Trizol及去RNA酶处理的物品购自美国Sigma公司。RT-PCR引物由赛默飞世尔科技(中国)有限公司合成。Tranwell小室、细胞培养板及计数板购自美国康宁公司。 DMEM培养液、胎牛血清、胰酶等细胞培养试剂购自美国Gibco公司。

1.2 细胞培养及转染 U87细胞在37 ℃和含5% CO2的条件下用含10%胎牛血清、1% 100U/L青/链霉素的DMEM 培养液进行常规培养。实验分3组：对照组、阴性对照组和RNF187过表达组。阴性对照组和RNF187过表达组U87细胞分别加入等滴度纯化的腺病毒表达载体AAVrh.10 Negative、AAVrh.10 RNF187，对照组加入等体积PBS，共培养12 h。……