庄 彪 闵志均 倪 熊 王廷峰 吴德俊 崔 鹏

结肠直肠癌(carcinoma of colon and rectum，CRC)是世界上第三大常见的癌症与第四大死亡原因的胃肠道恶性肿瘤，其具有高复发率和高致死率的特点[1～5]。研究表明不良饮食习惯、肠道炎症、肠息肉、遗传、年龄等增加患癌风险，并且年轻患者侵袭更强[6,7]。如何探索结直肠癌新的作用机制开发新的疗法成为研究的新方向。长链非编码 RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一种超过200个核苷酸且不翻译成蛋白质的转录本，且被认为没有生物学功能的转录“噪声”[8,9]。研究表明，在肿瘤中其参与增殖、凋亡、迁移、侵袭、转移等过程[10,11]。本研究通过生物信息学筛选发现lncRNA-AK126393与结直肠癌自噬相关，并在结直肠癌细胞中进行表达鉴定，进一步干预其表达探讨其在结直肠癌中的作用机制。

材料与方法

1.实验材料：MonAmpTMSYBR®Green qPCR Mix(MQ10301S，苏州莫纳生物科)；PrimeScript RT Master Mix (RR036A，日本TaKaRa公司)；RNAiso Plus(9109，日本TaKaRa公司)；Annexin V-FITC/PI apoptosis kit(70-AT101-100，杭州联科生物技术股份有限公司)；Cell cycle staining kit(70-CCS012，杭州联科生物技术股份有限公司)；Lipofectamine TM 2000(11668030，美国Invitrogen公司)；Fetal Bovine Serum(10099141，美国Gibco公司)；RPMI1640培养基(31870082，美国Gibco公司)；Bcl2(cst- 3498)、Bax(cst- 2774)、PI3K(cst- 4249)、P-PI3K(cst- 13857)、Akt(cst- 9272)、P-Akt(cst- 4060)、LC3(cst- 12741)和GAPDH(cst-5174)购自美国Cell Signaling Technology公司；质粒构建、引物合成、二抗等常用生化试剂购自生工生物工程(上海)股份有限公司；人结直肠癌细胞系HCT-116、SW480、SW620和正常人结肠组织细胞CCD-18CO购自上海富衡生物科技有限公司;枪头、细胞培养板等常用耗材购自无锡耐思生命科技股份有限公司。

2.实验方法：(1)细胞培养和转染：人结肠癌细胞系和正常人结肠组织细胞培养均用10%FBS+1%双抗的RPMI164完全培养基进行培养，静置于37℃的恒温培养箱中进行培养，当细胞密度超过80%后进行消化传代接种，按105个/孔的密度将细胞接种与6孔板中，细胞转染按照Lipofectamine TM 2000转染试剂说明书进行操作。……