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犬博卡病毒结构蛋白VP1多克隆抗体的制备及特异性鉴定

2021-12-27孙锦涵张淋然丁彦琴孙玉宁

中国动物传染病学报 2021年6期

穆 乐,孙锦涵,张 健,张淋然,丁彦琴,孙玉宁

(1.宁夏医科大学基础医学院,银川 750004;2.海南医学院临床医学院,海口 571199)

犬博卡病毒(Minute virus of canine,MVC)属于细小病毒家族的博卡病毒亚家族成员之一。博卡病毒属主要含有牛博卡病毒(Bovine parvovirus,BPV)、犬博卡病毒(MVC)以及人博卡病毒(Human bocavirus,HBoV)3个家族成员。近年来,又相继在黑猩猩(Gorilla bocavirus,GBoV)、猪(Porcine bocavirus,PBoV)、猫(Feline bocavirus,FBoV)、犬(Canine bocaviruses,CBoV)以及加利福尼亚海狮中发现了博卡病毒的新家族成员[1-4]。细小病毒是一种无包膜、分子量小、线性单链的DNA病毒,基因组大小为5 kb[5]。MVC基因组全长为5402 nt,包含3个开放阅读框(open reading frame,ORF),分别编码非结构蛋白NS1(85 kDa)、NP1(20 kDa),结构蛋白VP1(81 kDa)、VP2(63 kDa)、VP3(61 kDa)[6]。

VP1和VP2蛋白是细小病毒衣壳的主要结构蛋白,其中VP2蛋白约占病毒粒子衣壳蛋白的90%,VP1蛋白约占10%[7]。细小病毒的VP1和VP2基因属于重复序列结构基因,它们编码的结构蛋白存在一段相同的氨基酸序列:VP1蛋白在N端多出一段氨基酸序列,是VP1蛋白所独有序列(独特区),其后续的氨基酸序列与VP2氨基酸序列一致。研究发现,细小病毒VP1和VP2蛋白参与到病毒感染宿主细胞的过程,并且VP1蛋白在病毒衣壳蛋白的合成及形成感染性颗粒的过程中起着重要作用。VP1蛋白N端的独特区域含有磷脂酶A2(PLA2)的保守序列(如HDXXY、YXGXG等区域),具有磷脂酶A2活性,其功能对于病毒DNA从吞噬体进入细胞核发挥重要作用[4,8]。博卡病毒 VP1在N端前有132个氨基酸是VPl蛋白所独有的,剩余571个氨基酸与VP2氨基酸序列完全一致。本研究前期通过突变的方法,改变MVC的磷脂酶A2的保守序列氨基酸,发现酶活性的改变明显影响了MVC在宿主细胞中的DNA复制能力[6],说明VP1结构蛋白在MVC基因组复制中发挥作用。……

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