马林玉，胡家银，林 煊，陈鹤丹，谢颖，付文莉，杨君仪，刘丽娜

（贵州医科大学生物与工程学院 生物与医学工程重点实验室 贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心 医药生物技术工程研究中心，贵阳 550025）

奶牛乳房炎（bovine mastitis）是造成乳品工业和奶牛生产巨大经济损失的重要疾病，发生的重要原因是病原细菌感染[1]。无乳链球菌（Streptococcus agalactia），是引起奶牛乳房炎最主要病原菌之一。兽医临床常采用抗生素进行治疗或/和预防奶牛乳房炎[2-3]。抗生素残留以及长期使用以致耐药菌株产生并在牛群中持续存在[4-5]，导致严重的食品安全问题。中草药是天然物质，具有低毒、无抗药性、功能性强等特点，有效成分主要有多糖、生物碱、甙类等，中药制剂具有促进动物生长、提高饲料转化率、抗菌、抗病毒、增强免疫力等功能[6]。中草药替代抗生素是新的发展方向。近年来，从天然产物中寻找新的抗菌药物成为广大科学研究者的研究热点[7]。为实现经济、快速、高通量、大规模筛选无乳链球菌天然抗菌物质，需先建立一种简单、能准确反映活细菌细胞数量的计数方法。MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法，具有简单、快速、灵敏度高等特点。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等[8]。本研究以平板菌落计数法作为参照方法，探讨并优化MTT法定量检测无乳链球菌活细胞数有关的影响因素，获得了最适反应条件，建立了一种定量检测无乳链球菌活菌数的MTT法。……