基于p54的非洲猪瘟抗体胶体金检测方法建立
2021-12-27戴建华王豪伟张紫菡
戴建华,王豪伟,张紫菡
(江苏农牧科技职业学院,泰州 225300)
非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)引起的猪的一种烈性、高度接触性传染病,对全世界养殖业造成了严重威胁[1-2]。2018年8月起,疫情从沈阳暴发,并不断扩散、蔓延至全国,给全国造成了巨大经济损失,严重影响了养猪业的健康发展。及时的检测可有效降低经济损失。目前ASF的检测,主要有基因检测、病原检测和抗体检测[3]。其中前两者对急性型ASF的敏感性较高,是ASFV早期感染检测的金标准,但需要在特定实验室、特定条件下开展,不适用于现场应用[4-6]。ASFV感染猪的抗体效价可以反映受感染动物的生存时间,而且抗体检测法相比前两种检测方法,也更加方便、廉价、快速,可用于大规模流行病学调查和无症状感染猪的筛查。
ASFV是线性双股DNA病毒,基因组长为170~193 kb,可编码包括p72、p54、p12等在内的50多种病毒结构蛋白,这些蛋白大都与病毒吸附、毒力、细胞凋亡及免疫应答相关[7-9]。p54蛋白是研究较多的蛋白之一:Kollnberger等[10]率先使用康复猪筛选到p54等14种蛋白可以产生抗体反应蛋白;曹琛福等[11]用原核表达的p54蛋白作为包被原建立了竞争ELISA检测方法;Tesfagaber等[12]建立了基于p54单克隆抗体的竞争性酶联免疫吸附试验(competitive enzyme-linred immunosorbent assay,cELISA);Reis等[13]发现p54等12种蛋白能引发强的IgG应答,使用p54蛋白检测既能检测到IgG反应又能检测到IgM;Gallardo等[14]用原核系统表达的p54、pK205R、pB602L、pA104R这四种蛋白建立了ELISA抗体检测方法,研究发现与OIE推荐的方法相比较,前三者检测效果更好;张鑫宇等[15]建立了基于p54的抗体胶体金试纸检测方法。……
