周昌娈，丁 铲，孟春春，孙英杰，仇旭升，廖 瑛，刘炜炜，宋翠萍，谭 磊

（中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241）

外泌体是一种由细胞主动分泌的具有脂质双分子层结构的囊泡，直径为30～150 nm，其形状类似于茶托或一侧凹陷的半球形[1]。在外泌体发现初期，研究者一直认为其功能仅仅为携带细胞废弃蛋白[2]，但约十年后发现，外泌体是另一种新型的细胞间通讯方式[3]，参与肿瘤细胞的侵袭、迁移以及肿瘤微环境的形成等过程[4-5]。近些年研究结果发现，外泌体内容物极其丰富，包括RNA[6]、蛋白[7]以及脂类[8]，其中microRNA是占比最多的一类[9]。

microRNA是一类高度保守的大小约为21 nt的非编码RNA，通过其种子序列以完全或不完全匹配的方式结合靶基因3'UTR，在转录或转录后水平上实现对靶基因表达的调控[10]，目前已有多篇关于microRNA在病毒感染中作用的报道研究[11-13]。新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV），单股负链RNA病毒，属副粘病毒科，能够在禽类生产中引起较大的经济损失，近年来，NDV在肿瘤治疗[14-15]以及病毒载体[16]等方面展现出较大的研究潜力。然而目前关于外泌体中microRNA在NDV感染过程中的作用仍鲜有报道。

为此，本研究利用NDV感染HeLa细胞，收集细胞上清液，分离提取外泌体，并采用microRNA芯片技术分析microRNA表达情况，比较NDV感染的HeLa细胞的外泌体与未经病毒感染的HeLa细胞的外泌体两样本之间的microRNA表达差异，以期为后续外泌体microRNA在NDV感染中的研究提供初步理论基础。

1 方法与材料

1.1 细胞与试剂宫颈癌细胞株HeLa由中国农业科学院上海兽医研究所水禽病毒病团队提供。……