董亚青，彭仪伟，王永娟，施鑫蕊

（江苏农牧科技职业学院动物医学院，泰州 225300）

1型鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus，DHAV-1）属于小RNA病毒科的成员，主要引起雏鸭的急性病毒性肝炎，该病传播速度快，病死率高，对养殖业的危害较大[1]。疫苗免疫接种是预防和控制DHAV-1感染最基本、最有效的措施，但近年来接种过DHAV-1疫苗的雏鸭也广泛发病，因此，寻找新的预防和治疗DHAV-1感染方法尤为重要。DHAV-1分子生物学的研究起步较晚，全基因组序列直到2006年才首次被报道[2]，基因组为约7690个核苷酸组成的单股正链RNA，编码2249个氨基酸，编码蛋白为：5'-UTR-VP0-VP3-VP1-2A1-2A2-2A3-2B-2C-3A-3B-3C-3D-3'UTR[3]。3D蛋白是RNA依赖的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA Polymerase，RdRp），能特异性地识别病毒RNA，催化依赖RNA模板的基因组复制，在DHAV-1的基因复制过程中起着至关重要的作用[4]。

RNA干扰（RNA interference，RNAi）是由双链RNA诱发同源mRNA降解，使靶基因沉默的现象[5]。目前，RNAi技术已被广泛应用于研究基因功能、抗病毒感染、肿瘤治疗等领域，该技术不仅在人病毒病防治方面成功尝试，在动物病毒病防治方面的研究也较多[6-8]。本研究在已筛选出的能有效沉默DHAV-1RdRp基因siRNA的基础上，利用慢病毒载体表达siRNA以抑制DHAV-1的复制，并通过细胞和鸭胚来检测其抑制效果，为应用RNAi技术控制DHAV-1的感染奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料限制性内切酶、T4 DNA连接酶、TaqDNA聚合酶购自Fermentas公司；TRIzol购自北京鼎国公司产品；DMEM培养基购自GIBCO公司；HEK293T细胞由扬州大学孙怀昌教授惠赠；DHAV-1 SH毒株由中国农科院上海兽医研究所惠赠；鸭胚成纤维细胞为自制；鸭胚购自山东农业科学研究院；pPLK/GFP/+Puro载体、即用型慢病毒包装质粒p MD2．G和psPAX2购自镇江维根生物科技有限公司；……