刘丹丽，徐建峰，周欢欢，王霖玲，邵喜英△

(1.绍兴第二医院医共体总院肿瘤内科，浙江绍兴312000；2.中国科学院大学附属肿瘤医院/浙江省肿瘤医院乳腺内科，杭州 310000；3.浙江省绍兴市中医院药剂科 312000)

乳腺癌是全世界三种最常见的癌症之一，威胁女性健康[1]。有关乳腺癌发病病因尚不完全清楚，随着医学的发展，乳腺癌的预后得到了一定程度的改善，但其发病率仍然在逐年升高[2]。因此，研究可能与乳腺癌发生有关的基因，有助于解析乳腺癌的发病机制。泛素蛋白酶体系统(UPS)是真核细胞中大多数蛋白质的降解途径，与多种生物学过程和信号通路有关[3]。泛素结合酶E2T(UBE2T)是UPS系统的重要组成部分，有研究表明，UBE2T在多种肿瘤组织和细胞中存在过表达[4-5]。PEREZ-PENA等[6]研究表明，UBE2T在乳腺癌患者中存在过表达，且与乳腺癌患者的不良预后有关。然而有关UBE2T对乳腺癌细胞影响的研究较少，本研究通过体外培养乳腺癌细胞，并转染UBE2T-siRNA质粒，研究UBE2T-siRNA对乳腺癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响，为研究乳腺癌的发生、发展机制提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1细胞

乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7、MDA-MB-468、HCC1937及乳腺正常细胞系MCF-10A(TCHu227、SCSP-531、TCHu136、TCHu148、SCSP-575)，购自中国科学院细胞库。

1.1.2试剂

RPMI 1640培养基(61870036)、胎牛血清(10099)、青霉素-链霉素(15070063)、胰蛋白酶(25200056)，购自美国Gibco公司；Lipofectamine 3000试剂盒(L3000015)，购自美国Invitrogen公司；RNAiso plus(9108Q)、逆转录试剂盒(RR037)、实时荧光定量试剂盒(RR820Q)，购自日本TAKARA公司；单抗细胞周期蛋白D1(CyclinD1，ab16663)、β-连环蛋白(β-catenin，ab184919)、神经型钙黏附蛋白(N-cad，ab76011)、上皮型钙黏附蛋白(E-cad，ab133597)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9，ab32539)、c-Myc(ab32072)、三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH，ab8245)，购自美国Abcam公司；四甲基偶氮……