沈 雪， 薛 艳， 陈 龑， 李 名， 张 琥， 曹月龙

(上海中医药大学附属曙光医院， 上海 201203)

膝骨关节炎(knee osteoarthritis，KOA)是由环境刺激、机械应力、年龄因素等导致膝关节软骨损伤、退变的疾病[1，2]。KOA属于中医学“膝痹”范畴[3]，而风寒湿邪外袭是其致病的重要因素。《素问·痹论篇》提及风属阳邪，为百病之长，性能疏散，易使腠理开泄；寒湿皆属阴邪，乘风邪侵袭人体，引起经络痹阻和气血不畅，说明风寒湿可进一步促进关节炎的发展，但目前缺乏相关实验证明。本文从实验角度构建风寒湿体内环境及风寒湿关节炎大鼠体内外模型，体内实验通过观察软骨组织学及检测血清中炎症因子表达，体外实验通过观察加入风寒湿血清的软骨细胞形态及检测相关基因表达，证明“风寒湿”外邪可促进膝骨关节炎进展。本研究已通过上海中医药大学实验动物福利与伦理委员会审查，伦理编号PZSHUTCM190322003。

1 材料

1.1 动物

体内实验选用SPF级5周龄雄性SD大鼠45只，体质量180～200 g，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司，实验动物许可证号SCXK(沪)2013-0016。体外实验选用SPF级新出生24 h内的裸鼠，体质量1.5～4 g，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司，许可证号码SCXK(沪)2018-0006。

1.2 主要试剂与仪器

HE染色试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司，货号C0105 S)；白细胞介素(interleukin, IL)-1β、IL-6 ELISA试剂盒(美国R&D公司，货号分别为RLB00，R6000B)；DMEM培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素试液、0.25%胰蛋白酶(Gibco，货号分别为C11995500BT，10270106，15140-122，25200-056)；胶原酶Ⅱ型(DIYIBIO，货号DY40126)；甲苯胺蓝(Servicebio，货号G1032)；RNA文库构建试剂盒(NEB，货号E7530)。

人工气候箱(型号LTC-1000，上海三腾仪器有限公司)；石蜡切片机(型号RM2165，德国Leica公司)；……