陈倩倩，雷 晴，杨 婷，向浩瑜，肖 敏*

(1.成都中医药大学，四川 成都 610072；2.成都中医药大学附属医院，四川 成都 610072)

七星丹是蜀中疡医大师文琢之教授苦心研究的成果，具有悠久的历史，已在成都中医药大学附属医院应用于临床 60 余年，治愈了数以万计的皮肤慢性溃疡患者，临床疗效满意[1]。近年来对于丹药外用的安全性越发重视，尤其是含汞的丹药，外用含汞丹药具有广谱杀菌、消炎、袪腐生肌等作用，但缺乏临床上相关的毒副作用检测以及安全性研究。常见的不良反应包括皮肤过敏反应、恶心、腹痛等，重则可出现肝肾功能损伤及多器官衰竭[2-3]。因此我们在前期临床研究的基础上，拟对七星丹治疗慢性皮肤溃疡的安全性进行实验研究，为临床推广打下基础。

1 实验材料

1.1 实验动物

SPF级SD大鼠，雄性，体重 180～200 g。由成都达硕实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证号：SYXK(川)2014-189。

1.2 药品试剂

七星丹及九一丹均由成都中医药大学附属医院制剂室提供。七星丹药物组成：煅石膏、寒水石各30 g，硼砂、朱砂、轻粉、银珠、冰片各9 g；九一丹药物组成：红升丹3 g，锻石膏27 g；青霉素钾溶液(生产批号：(2012)120151254)；0.8%硫化钠(生产批号：CAS1313-84-4)；10%水合氯醛(生产批号：CAS302-17-0)；50%冰醋酸溶液(生产批号：110314)；1∶5 000呋喃西林溶液(生产批号：040804)。

1.3 检验试剂

Mouse ALT ELISA KIT，规格：48孔/盒，上海茁彩生物科技有限公司(生产批号：ZC-38191)；Mouse AST ELISA KIT，规格：48孔/盒，上海茁彩生物科技有限公司(生产批号：ZC-38192)；Mouse BUN ELISA KIT，货号：ZC-38534，规格：48孔/盒，上海茁彩生物科技有限公司生产。

2 研究方法

2.1 大鼠慢性溃疡模型的建立[4]

健康 SD 大鼠 15 只，实验室适应饲养3天后，肌注青霉素钾溶液(4 000 U/只)，连续4 d，防止感染。以8%硫化钠给大鼠背部脱毛，腹腔注射10%水合氯醛麻醉(0.3 mL/100 g)，在背部制备1.5 cm×2 cm缺损性创面，之后以50%冰醋酸溶液涂创面(1次/d，7 d)，形成慢性皮肤溃疡模型。

2.2 实验方法

按体质量将造模成功的大鼠运用区组随机的方法分为3组：空白对照组、九一丹组、七星丹组。一周后开始给药，给药前用生理盐水棉球将所有溃疡大鼠的创面清洗，再以1∶5 000呋喃西林溶液清洁创面；九一丹组外用九一丹18.75 mg/cm2、七星丹组外用七星丹37.5 mg/cm2“飞”到溃疡面上[5]，两层消毒干纱布覆盖后用医用胶带固定，每天固定时间换药1次(早上8点)；空白组只采取呋喃西林溶液外涂；各组大鼠连续给药28 d。

2.3 检测指标

2.3.1 生化指标检测 检测大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)的含量。取大鼠腹主动脉5～8 mL(不加抗凝剂)，分离血清，采用ELISA检测大鼠谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)的含量。

2.3.2 大鼠肝脏、肾脏组织病理学检测 最后 1 次给药后的第 2 天，给大鼠腹腔注射10%水合氯醛(0.3 mL /100 g)麻醉处死，取出肝脏、肾脏并剥除脂肪和结缔组织，用生理盐水冲洗，滤纸将水分吸干，再放入-20℃冰箱中保存。按照常规方法制备石蜡切片，光学显微镜下观察肝脏、肾脏组织病理改变。

2.4 统计学处理

3 结果

3.1 七星丹对大鼠生化指标的影响

观察七星丹对大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)的影响。与空白组相比，各组大鼠(n=5)血清中ALT、AST、BUN浓度无统计学差异(P>0.05)，均在正常范围内，表明外用七星丹对SD大鼠血生化指标未造成不良影响。见表1。

表1 各组大鼠血清中ALT、AST、BUN浓度的变化

3.2 七星丹对大鼠肝脏、肾脏的影响

大鼠肝脏及肾脏HE染色后，观察结果如下。

(1)空白组。肝脏：肝脏组织被膜完整，各小叶间分界不明显，肝索排列较整齐；肝小叶内肝细胞核大而圆，核仁明显，部分见双核；其中2例(2/5)见肝细胞轻微或轻度空泡变性，胞质染色不均匀，内见数量不等的空泡；肝窦无明显扩张、瘀血或炎细胞浸润；门管区内小叶间静脉、动脉和胆管结构完整清晰；未见其他明显病理变化(见图1、图2)。肾脏：肾脏组织被膜完整，皮质和髓质分界清晰，皮质区肾小球形态正常，未见明显毛细血管基底膜增厚或炎性渗出；肾小管排列紧密，管状结构规则，轮廓清晰，无明显萎缩或扩张；肾小管上皮细胞形态正常，细胞呈单层排列，排列整齐紧密，胞核大而圆，核仁明显，胞质染色较为均匀；间质内未见明显充血、出血、炎细胞浸润或纤维组织增生；髓质区集合管排列紧密，结构基本正常；未见明显病理变化(见图1、图2)。

(2)九一丹组。肝脏：肝脏组织被膜完整，各小叶间分界不明显，肝索排列较整齐；其中3例(3/5)见肝细胞轻微空泡变性，1例(1/5)中央静脉周围见少量肝细胞小灶状坏死，胞核固缩或碎裂，胞质崩解，细胞形态模糊不清；肝窦无明显扩张、瘀血或炎细胞浸润；门管区结构完整清晰；未见其他明显病理变化(见图1、图2)。肾脏：肾脏组织被膜完整，皮质和髓质分界清晰，皮质区肾小球形态正常，未见明显毛细血管基底膜增厚或炎性渗出；其中3例(3/5)少量肾小管上皮细胞变性、坏死胞质染色不均匀，胞核固缩、碎裂或溶解消失；2例(2/5)少量肾小管上皮细胞增生，可见细胞核肿大，排列紧密，数量增多，核分裂象不明显；其中1例(1/5)间质内可见少量纤维组织增生伴淋巴细胞浸润；髓质区集合管排列紧密，结构基本正常；未见明显病理变化(见图1、图2)。

(3)七星丹组。肝脏：肝脏组织被膜完整，各小叶间分界不明显，肝索排列较整齐；其中1例(1/5)见肝细胞轻微空泡变性，3例(3/5)少量肝细胞呈点状或小灶状坏死，胞核固缩或碎裂，胞质崩解，细胞形态模糊不清；其中1例(1/5)肝窦轻微扩张、瘀血；门管区结构完整清晰；未见其他明显病理变化(见图1、图2)。肾脏：肾脏组织被膜完整，皮质和髓质分界清晰，皮质区肾小球形态正常，未见明显毛细血管基底膜增厚或炎性渗出；2例(2/5)少量肾小管上皮细胞变性，其中1例(1/5)少量肾小管上皮细胞坏死及增生；1例(1/5)间质内毛细血管轻微充血；髓质区集合管排列紧密，结构基本正常；未见明显病理变化(图1、图2)。

图1 各组大鼠肝脏HE染色结果

图2 各组大鼠肾脏HE染色结果

4 讨论

慢性皮肤溃疡(CSU)因其迁延不愈或愈后极易复发，故称之为难治性溃疡，且多合并下肢静脉曲张、糖尿病等疾病，给患者带来极大的精神折磨和身体摧残。慢性皮肤溃疡病因较为复杂，目前尚未有明确的治疗指南，现阶段治疗手段包括：①药物治疗(系统和局部)；②外科手术；③高压氧疗；④生物治疗等[6]。其中大部分治疗花费较为昂贵，患者及其家属需承担较大的经济压力。

七星丹作为我院皮肤科专家文琢之教授的研究成果，主要用于临床治疗慢性皮肤溃疡，具有操作简易、疗效确切的优点。该方由煅石膏、寒水石、硼砂、朱砂、轻粉等药物组成，对各类溃疡都有很强的解毒消肿、生肌敛疮作用，同时可促进创面愈合，明显缩短患者的治疗时间[7]。

外用丹药在当今的临床治疗上越来越常见，也是中医特色治疗手段之一。外用丹药包含的药物常涉及雄黄、硫黄、朱砂、铅丹、砒石等“有毒”中药，故其安全性是不容忽视的问题，需要引起临床医师的高度重视[8]。七星丹中朱砂的主要成分为硫化汞(Hg S)，清·黄元御《长沙药解》有言：“朱砂，味甘，微寒，入手少阴心经，善安神魂，能止惊悸。”此外朱砂还有收敛生肌的作用。现代临床研究表明，外用朱砂具有抑制细菌生长、减轻炎症反应、促进生长因子分泌等作用[9]，但其在临床上可能因使用的剂量、创面面积、治疗时间等导致汞蓄积。汞在不同形态下导致的汞中毒所表现的临床症状有所不同，其中以有机汞毒性最大，因其在全身可广泛分布，可造成严重的中枢神经系统及周围神经系统损伤[9]；朱砂等含汞药物是以无机汞的形式存在，其对机体造成的损伤主要是损伤肝肾等代谢相关脏器。张伊莉等[10]研究发现，经皮肤吸收所导致的汞中毒以亚急性中毒为主，皮肤过敏反应并不突出，部分患者首发疾病为肾系病。在治疗慢性皮肤溃疡时，七星丹中的含汞成分因皮肤的不完整性会通过皮肤吸收入血，若溃疡创面过大、治疗时间过长等将会在相应的器官中产生汞蓄积，尤其是蓄积在肾脏的近端小管和集合管[9、11-12]。因此，确保外用七星丹的安全性十分必要。

本研究以客观数据揭示了外用丹药——七星丹治疗皮肤慢性溃疡的有效性和安全性，为临床提供了可资借鉴的治疗方法，为继承和发扬中医外科学尽绵薄之力。