刘 双 赵 新 李瑞环 刘 娜 兰青阔 檀建新 王 永,*

(1.天津市农业科学院 生物技术研究所，天津 300381；2.河北农业大学 食品科技学院，河北 保定 071001)

自1996年国际上首次种植转基因作物至今已有24年的时间。转基因作物的发展突飞猛进，很多国家和地区均实施了标识管理制度，并设定了阈值。如欧盟实施强制性的转基因标识制度[1]，我国目前对转基因产品也实施强制标识制度。目前，转基因检测的方法主要是基于核酸检测的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)技术[2]、核酸杂交技术[3]和基因芯片技术[4]；基于蛋白质检测的Western Blot[5]和酶联免疫吸附测定[6]等。其中应用最广泛的是基于核酸检测的普通PCR方法和实时荧光PCR方法。我国已经研制了‘ZH 10-6’大豆的定性PCR检测方法，实时荧光定量PCR方法[7]已初步建立，但是其数字PCR定量方法尚未见报道。相对于转基因成分定性PCR检测方法，定量PCR检测方法不仅可以检测产品含有的转基因成分，而且可以确定转基因成分的含量，更加有助于转基因产品的监管。

数字PCR(digital polymerase chain reaction，dPCR)是在实时荧光PCR基础上发展起来的微量DNA分子定量检测新技术。dPCR是将PCR体系分配到足够小的反应单元中，实现每个反应单元只有单个模板分子进行PCR扩增，再采用泊松分布原理，根据阳性微滴与阴性微滴数的比例计算目标分子拷贝数，实现绝对定量[8-10]。该方法降低了标准曲线对测量结果产生影响等问题，降低了基体效应，实现了PCR扩增的样品分离，消除了本底信号的影响，提高了低拷贝DNA的扩增灵敏度[11]。相比实时荧光PCR，数字PCR具有更好的测量独立性，且无需任何校准物，具有更高的特异性、灵敏度、精确性和稳定性。……