黄娴 李立新 李双玉 吴丽娜 解金辉

Rh血型系统（ISBT004）包含RHD和RHCE两个同源连锁基因，分别编码D抗原和CcEe抗原，是最重要的红细胞血型系统之一。RHAG血型系统（ISBT030）由RHAG基因编码Rh相关蛋白RhAG，RhAG蛋白对RhD/CE抗原在红细胞膜上的正确连接定位十分重要[1]。RHAG基因变异可导致Rh血型抗原显著减少，称为Rhmod[2]。我们通过1例由于RHAG新复合杂合突变导致的Rhmod家系进行血清学与基因检测，并采用生物信息学方法和蛋白结构模型，初步探讨这例新的复合突变导致Rhmod型的分子基础。

材料与方法

1 研究对象 Rhmod型家系来自天津，先证者父亲已故，无兄弟姐妹子女，直系亲属仅现存母亲。先证者，女，18岁，无输血史和妊娠史，因溶血性黄疸收住入院，总胆红素51 μmol/L，间接胆红素27 μmol/L，血红蛋白93 g/L。医院初检为Rh阴性，送检血液中心进行交叉配血，为切脾手术备血。

2 试剂与仪器 抗C、c、E、e（CE-IMMUNODIAGN OSTIKA公司），抗D试剂4种（上海血液生物，加拿大宜美康，CE-IMMUNODIAGNOSTIKA，Sanquin），DNA提取试剂盒（Magen公司），Taq DNA聚合酶（Takara公司）。微柱凝胶抗球蛋白检测卡、孵育器、卡式离心机（BIO-RAD公司），离心机（KUBOTA公司），分光光度计（IMPLEN公司），PCR仪（ABI公司），电泳仪（Thermo公司），凝胶成像仪（北京东讯天地）。所有试剂与仪器均在有效期内使用。

3 方法

3.1 Rh抗原检测：采用试管盐水法、微柱凝胶卡法，使用4种克隆株的抗D试剂检测先证者RhD抗原。用吸收放散试验检测其红细胞是否表达微量的D抗原，放散法使用Sanquin公司的酸放散试剂盒。由于样本量所限，未进行RhCE抗原的吸收放散试验。采用试管盐水法和微柱凝胶卡法检测所有受试者的RhCE抗原、不规则抗体筛查和直抗。

3.2 DNA提取及PCR扩增：采用蛋白酶K法抽提所有受试者的外周静脉血DNA，检测抽提DNA的浓度和纯度。……