董世建，许培，章良弼，李增礼，程婷，王荣海，魏兆军

1.安徽安科生物工程（集团）股份有限公司，安徽合肥230088；2.合肥工业大学食品与生物工程学院，安徽合肥230009

干扰素（interferon，IFN）是一类具有抗病毒、抗增殖和免疫调节作用的细胞因子［1］。聚乙二醇化重组人干扰素（PEGgylated-recombinant human interferon，PEG-rhIFN）是将重组人干扰素（recombinant human interferon，rhIFN）分子与聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）通过共价键链接形成的化学修饰蛋白药物。PEG-rhIFN 不仅保持了IFN 的抗病毒及免疫调节作用等生物活性，并增强了其理化及生物学稳定性，降低了免疫原性和毒性，显著延长了半衰期，每周仅需注射1 次，患者依从性更高。目前，国内已上市的PEG-rhIFN 产品有瑞士Roche 公司的派罗欣、美国Schering-Plough 公司的佩乐能及厦门特宝生物工程股份有限公司的派格宾，主要用于慢性病毒性肝炎的治疗［2-8］。

由于PEG 修饰后的蛋白与原型蛋白在质量属性方面存在较大差异，WTO 明确提出，与PEG 有关的质控项目（如修饰率、修饰位点、游离PEG 含量等）需重点关注［7］。另外，《生物技术药物研究开发和质量控制》中也明确规定，必须进行修饰位点确定和产品活性相关的理化指标的研究［9］。本课题组前期采用相对分子质量20 000 的单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯（mPEG-succinimidyl carbonate，mPEG-SC）对 rhIFNα2b 进行修饰，修饰位点为其肽链上 α 或 ε 的氨基，所获得的 PEG-rhIFNα2b 与天然IFNα2b 氨基酸序列一致，由165 个氨基酸残基组成，理论相对分子质量为39 000，无糖基化修饰。IFNα2b 肽链中含有 10 个赖氨酸（K）残基（分别为K31、K49、K70、K83、K112、K121、K131、K133、K134和 K136）［10］，理论上，上述 10 个赖氨酸残基及 N-末端氨基酸残基均可与mPEG-SC 结合，由于修饰位点的位置是影响PEG-rhIFN 空间结构及生物学活性的关键因素，确定PEG 修饰位点及不同修饰位点异构体所占比例对PEG-rhIFNα2b 质量具有重要影响。……