姜秀春, 王德军, 于 贺

(辽宁省盘锦辽油宝石花医院 呼吸内科, 辽宁 盘锦, 124010)

肺上皮细胞是维持肺结构完整性以及正常肺功能的重要细胞[1-2]。木犀草素(Lut)可抑制下咽癌细胞、乳腺癌细胞、膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移并诱导其凋亡[3-5]。Hippo/Yes相关蛋白(YAP)通路已被证明与结肠癌、胃癌、肝癌等肿瘤的发生发展相关[6]; 该通路与主动脉瘤、组织纤维化、病毒性肝炎等人类疾病密切相关，通过低表达大肿瘤抑制基因2抑制Hippo信号通路，能改善急性呼吸窘迫综合征的肺水肿现象，调控肺内炎症反应[7]; YAP作为枢纽可通过调控Hippo通路抑制肝癌细胞增殖[8]。其中, 哺乳动物STE20样蛋白激酶1(MST1)和大肿瘤抑制基因(LAST1)为Hippo信号通路的上游效应蛋白，二者被磷酸化后可作用于YAP，且在正常情况下, YAP在细胞质中可参与正常组织的调节及代谢，维持细胞的正常状态。目前, Lut对博来霉素(BLM)诱导的肺上皮细胞Hippo/YAP通路及增殖凋亡的影响，尚未有报道。本研究将不同浓度的Lut应用于BLM体外诱导的BEAS-2B细胞后，检测其增殖及凋亡情况，并分析Hippo/YAP通路上MST1、LAST1和YAP的磷酸化水平，初步探讨其分子机制，为临床治疗肺损伤提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株: 人肺正常上皮细胞(BEAS-2B细胞，目录号: SCSP-5067), 由中国科学院典型培养物保存委员会细胞库提供。

1.1.2 主要试剂及仪器: 胎牛血清(FBS)和DMEM/F12培养基均购自美国Giboc公司; 四甲基亚砜(DMSO)、四甲基偶氮唑蓝(MTT)和β-actin鼠抗均购自美国Sigma公司; Lut 20 mg/支(纯度98%)购自上海源叶生物科技有限公司; 蛋白提取试剂盒、ECL显色试剂盒和BCA蛋白定……