姚红兵 吴嘉兴 郭 威 文雪霖 蒋建晖 刘翔峰

肝细胞癌(肝癌)是常见的恶性肿瘤，缺氧是恶性肿瘤微环境的主要特征之一，肝癌细胞在缺氧环境下可通过增强糖酵解代谢方式，维持细胞增殖的能量需求，从而促进肝癌进程[1,2]。糖原合成激酶(glycogen synthase kinase-3β, GSK-3β)介导的信号通路对细胞的增殖、分化及能量代谢具有重要作用，其活性受到Akt的调控。黏着斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)是一种胞质非受体蛋白酪氨酸激酶，与肿瘤的多种生物学行为密切相关，磷酸化的FAK可通过结合PI3K/Akt促进癌细胞的增殖[3]。研究发现，FAK在肝癌组织中异常表达及活化，并与肝癌进展有显著相关性，可作为肝癌药物开发的新靶标[4]。多激酶抑制剂CT-707是一种新型FAK抑制剂，可通过抑制FAK的磷酸化发挥良好的抗肿瘤活性[5]。笔者前期研究已证实CT-707在肝癌动物模型中可抑制肝癌细胞的增殖以及肿瘤形成，促进癌细胞的凋亡[6]。故本研究结合肝癌细胞在缺氧微环境中的代谢特点，基于PI3K/Akt/GSK-3β信号通路，旨在进一步探讨新型FAK抑制剂CT-707的抗肝癌作用及机制。

材料与方法

1.试验材料：人肝癌HepG2细胞株购自中国科学院上海细胞库，使用含10%胎牛血清及1%双抗的改良Eagle培养基(DMEM)培养基，于5%CO2、37℃培养箱中常规培养。6周龄BALB/c裸鼠购自广西医科大学实验动物中心，在SPF级条件下饲养。CT-707购自美国MCE公司；DMEM、胎牛血清购自美国Gibco公司；cyclin D1、cyclin E、p-FAK、FAK、PI3K、Akt、p-GSK-3β、GSK-3β、PCNA、β-actin抗体购自英国Abcam公司；p-PI3K、p-Akt抗体购自美国CST公司；羊抗鼠二抗、羊抗兔二抗购自美国Sigma公司；HE染色试剂盒、己糖激酶(HK)试剂盒、BCA蛋白定量试剂盒购自北京Solarbio公司；乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒购自南京建成生物；……