李琳 李建东 高志康 徐浩 崔艳峰

HCC 是人类最具侵袭性的恶性肿瘤,因为其转移和复发,被列为癌症相关死亡的最常见原因之一［1,2］。HCC 是一种与慢性炎症相关的肿瘤。在HCC 的炎症微环境中,入侵的炎症细胞主要是肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)［3］。研究表明,巨噬细胞的去除可以抑制肿瘤的进展和转移［4-6］。在肿瘤微环境下,研究巨噬细胞在HCC 发生发展中的分子机制［7］,将为靶向治疗HCC 提供新的策略。长链非编码RNA(LncRNAs)在癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移和转移等多种生物学过程中扮演着重要角色［8］,在HCC 的发生发展中起重要作用。GAS5(LncRNA growth arrest-special transcript 5)是GAS 家族的一员。以往的研究表明GAS5 对肿瘤的发生具有抑制作用［9］。但是GAS5 在巨噬细胞中的作用仍未可知。10 号染色体上缺失的PTEN是一种重要的肿瘤抑制因子。有研究表明,GAS5 通过与miR-32-5p、miR-103 或miR-222-3p 的靶结合,促进PTEN 的表达［10-13］。GAS5 通过直接抑制miR-21 的表达,进而下调与肿瘤细胞迁移和侵袭密切相关的基因［14］,即人程序性细胞死亡因子和PTEN的表达下调,最终抑制肿瘤细胞的迁移与侵袭。因此,本研究通过ELISA 和qRT-PCR 技术,分析GAS5 和PTEN 在TAMs 中的调控机制,探讨其在HCC 发生发展中的变化,为揭示HCC 的发病机制提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料 单核巨噬细胞(THP-1)获自中国科学院细胞库。所有引物均购自Takara 公司。用于检测的人肝癌组织及相应癌旁肝组织取自徐州医科大学附属医院肝胆外科手术切除标本。所有患者术前未接受过放疗或生物治疗等干预措施。取材后放入-80℃冰箱低温保存。

1.2 培养单核巨噬细胞 THP-1 在RPMI-1640 培养基(Sangon Biotech)中培养,该培养基含10%胎牛血清(FBS,Sangon Biotech)和1%青霉素/链霉素。……