张换勤 刘洋 郭旭 邢金良 权志博

早期诊断对提高肿瘤患者预后，降低死亡率具有重要意义。然而，早期实体瘤体积往往较小、肿瘤细胞含量低、携带的肿瘤特异突变信息也较少，因此早期诊断依然面临巨大挑战［1］。癌症细胞中存在的一些超低频突变能导致肿瘤治疗抵抗［2］，也是复发的基础［3］。由此可见，超低频突变的准确检测具有重要意义。液体活检技术是通过检验血液、尿液、唾液、胸腔积液等体液中的生物标志物对疾病进行诊断。其中，液体活检中最重要的检测内容之一是携带肿瘤特异性突变信息的循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA，ctDNA）［4］。然而，肿瘤患者血浆中可检测到的ctDNA突变含量极少，难以检测。有研究表明从Ⅰ期肺癌患者ctDNA中检测到的突变频率通常在千分之一以下，甚至达到十万分之一的级别，给检测带来了巨大挑战［5］。因此，超低频突变检测技术对ctDNA临床转化应用能否成功具有至关重要的作用。目前检测基因组超低频突变技术主要包括突变扩增系统（ARMS⁃PCR）、微滴式数字PCR（droplet digital PCR，ddPCR）和二代测序技术（next⁃generation sequencing，NGS）。ARMS⁃PCR成本低廉、操作简单，但灵敏度略低、稳定性欠佳。与ARMS⁃PCR相比，ddPCR具有较高的稳定性、准确性和灵敏度。然而，ARMS⁃PCR与ddPCR的通量均较低，且只能检测已知变异。NGS具有可同时检测多个基因、多种类型的未知突变等优势。但NGS实验环节较复杂，在样本制备、文库构建、上机测序及数据分析等过程中，诸多因素均可影响超低频突变检测的准确性［6］。本文就目前NGS检测超低频突变过程面临的挑战及解决策略作一综述。……