乙脑病毒RT-LAMP快速检测新方法的建立

2021-12-03卓泽文林彦汐李名志杨自兵朱丽婷孔令保江西农业大学生物科学与工程学院330045

今日畜牧兽医 2021年11期

卓泽文，林彦汐，李名志，杨自兵，朱丽婷，孔令保，王婷（江西农业大学生物科学与工程学院 330045）

流行性乙型脑炎是由乙型脑炎病毒（Japanese Encephalitis Virus，JEV）引起的一种蚊媒性人兽共患传染病[1，2]，在我国属乙类传染病，每年夏秋季重点传染病防控、灾后疫情防控都将其列为重点。另一方面，JEV给养猪业造成了很大的经济损失，仔猪、种猪、母猪感染后会导致繁殖障碍、流产甚至死亡[3，4]。近年来，随着养猪集约化程度的提升，大中型养猪企业受养殖量大、物流运输广等因素影响，致使多种病原菌混合感染、新病原菌感染、病原菌突变种感染等情况多发，难以判断致病原因，因此急需一种特异性强、灵敏度高、操作简便、成本较低的诊断方法。

2000年，Notomi T等[5]在《Nucleic Acids Research》上报道了一种环介导等温扩增（LAMP）技术，该方法通过采用具有高链置换活性的Bst DNA聚合酶，针对目的基因上的六段区域设计四条引物，在等温条件下、1h左右，高效、特异地扩增目的基因，反应结果可视化。一直以来，LAMP技术以其特异性强、灵敏度高、反应时间短、设备简单且鉴定便捷及时而受到研究人员青睐[6-11]。此项技术经过20年的发展，在指示剂、辅助剂、储存方法等方面得到了极大的发展[8-16]。特别是Bst 3.0 DNA聚合酶，加入了逆转录酶活性。因此本试验基于实验室保存的相关材料，以JEV P3病毒株为模板，使用Bst 3.0 DNA聚合酶利用RT-LAMP技术进行反应，建立一种新型、灵敏、快速、实用的JEV检测方法。