陈 琳， 李 卫， 黄国秀， 韦晓英， 刘 贺， 庞 羽， 罗珍玉， 蓝盈盈， 罗颖华

结肠癌是常见的消化道癌症之一，在全球癌症相关死亡原因中位列第三[1]，目前化疗是中晚期结肠癌的主要治疗形式。奥沙利铂(oxaliplatin，OXA)是第三代铂类化疗药物，其毒副反应轻、疗效好，已广泛用于大肠癌和胃癌等治疗。然而，癌细胞耐药性的产生显著降低了OXA化疗的疗效[2]。黄连素(berberine,Ber)属于异喹啉类生物碱，可用于治疗癌症和消化、代谢、心血管和神经系统疾病[3]。近年研究发现，Ber既可逆转乳腺癌对多柔比星的耐药性[4]，还可增强胃癌对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)的敏感性[5]，提示Ber在逆转肿瘤耐药方面具有重要的作用。本课题组既往研究发现，添加Ber可以显著降低OXA对THC-8307/OXA细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)，逆转了癌细胞对OXA的耐药性[6]。目前，关于Ber逆转结肠癌对OXA耐药性的机制研究报道较少，相关机制尚未明确。鉴此，本研究旨在探究Ber对人结肠癌耐OXA细胞(THC-8307/OXA细胞)耐药性的影响及其逆转机制，为Ber的临床应用提供实验室依据。

1 材料与方法

1.1材料 THC-8307/OXA细胞(批号：WG102808)由中国科学院细胞库提供。DMEM培养基和胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)购自Thermo Fisher公司。ANNEXIN V-FITC/PI凋亡检测试剂盒、噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)试剂盒购自北京Solarbio公司。OXA、Ber、鼠抗人P-gp(1∶1 000)抗体和鼠抗人GAPDH(1∶1 000)购自Sigma公司。兔单抗PI3K抗体(1∶1 000)、兔多抗p-AKT(1∶1 000)、兔单抗Akt抗体(1∶10 000)均购自Abcam公司。辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP)标记羊抗鼠二抗和HRP标记羊抗兔二抗购于Santa Cruz公司。总RNA提取试剂盒购自天根公司。逆转录试剂盒和TB Green Premix Ex Taq Ⅱ(Tli RNaseH Plus)试剂盒购自Takara公司。

1.2方法

1.2.1 细胞培养与分组 THC-8307/OXA细胞用含10%FBS的DMEM培养液，于37 ℃、5% CO2条件下培养，同时细胞培养液中添加2.5 μg/ml OXA维持其耐药性。……