李静 张燕 仵倩红

据世界卫生组织(World Health Organization，WHO)报道，全球范围内仍有近1/3的结核病患者未被诊断或报道，漏诊或漏报现象在儿童结核病、肺外结核和并发艾滋病患者中尤为明显[1]。儿童患者的呼吸道样本多为少菌型，许多HIV感染者也不能获取到检测结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)所需的标准呼吸道样本，均难以实现呼吸道样本的检测作用[2]，找到一种快速、低成本的非痰液诊断技术成为当前迫切所需[3]。抗酸杆菌涂片或分枝杆菌培养法一直是结核病诊断的“金标准”[4]，但对于非痰液样本(如血液、尿液等)，涂片法的阳性率更低，培养周期也过长，均难以满足临床检测的需求。而免疫学和分子生物学技术虽然在诊断敏感性和检测速度等方面较传统方法有了很大进展，但仍存在成本高、结果难以规范化、适用人群不广泛等诸多问题[5]。游离DNA(cell-free DNA，cfDNA)的检测在这种情况下应运而生，因其具有无创取材、样本易留取等特点，逐渐受到国内外研究人员的重视，成为结核病非痰液样本检测研究的热点，弥补了特殊结核病患者诊断的局限性。

一、cfDNA的来源及应用现状

cfDNA是游离核酸的一种存在于生物体液中无细胞状态的胞外DNA片段，有着比DNA更低的相对分子质量，常以70～200 bp短片段或21 kb长片段的DNA-蛋白质复合物形式存在[6]，被普遍认为是细胞坏死和凋亡过程中释放出来的[7-10]。细胞坏死后，由巨噬细胞对细胞碎片进行消化，从而将DNA片段释放到血液中；或在细胞凋亡时，大多数细胞的形态学发生改变，细胞核固缩，DNA断裂并释放入血[11-12]。……