张倩，张坤，张增强，李剑勇，崔芳*

1解放军总医院海南医院神经内科，海南三亚 572013；2空军军医大学神经生物学教研室，西安 710032

脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)及脑卒中后自发性运动功能恢复有限，主要原因是中枢神经系统(central nervous system，CNS)神经元损伤后很难再生[1-2]，尤其是皮质脊髓束(corticospinal tract，CST)几乎无再生潜能[3-4]。SCI后有限的功能恢复主要依赖于CST发芽[5]，大量研究证实，通过调控相关分子的表达增加神经元的内在再生潜能，从而促进CST再生，有助于损伤后运动功能的恢复[6]。SCI后运动功能恢复通常依赖以下两种方式：损伤后CST再生穿过损伤部位，或未损伤的轴突代偿性发芽，与中间神经元建立联系间接支配失神经的肌肉。鉴于CNS神经元再生能力弱，损伤后的轴突无法重建原始回路，能取得的功能恢复有限[7-8]，如何增加CST的发芽以促进功能恢复是目前迫切需要解决的难题。最近，在小鼠脊髓半切和脑卒中模型中的研究显示，信号分子骨桥蛋白(osteopontin，OPN)可增加神经元对胰岛素样生长因子1(insulinlike growth factor 1，IGF1)的敏感性，进而促进CST再生和发芽[9]。本研究采用小鼠单侧锥体束横断模型研究OPN/IGF1促进轴突发芽的分子机制，以期寻找促进CNS损伤后轴突再生的方法。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器 兔抗小鼠红色荧光蛋白(red fluorescent protein，RFP)多克隆抗体(ab34771，英国Abcam公司)；兔抗脊髓蛋白激酶Cγ(protein kinase Cγ，PKCγ)多克隆抗体(sc211)、兔抗小鼠胰岛素样生长因子受体(insulin-like growth factor receptor，IGFR)单克隆抗体(sc-712)(美国Santa Cruz公司)；兔抗小鼠核糖体蛋白S6激酶(ribosomal protein S6 kinase，pS6)单克隆抗体(4857，美国Cell Signaling Technology 公司)；神经元核抗原(neuronal nuclei antigen，NeuN)小鼠单克隆抗体(MAB377，美国Millipore公司)；Alexa FlourR647 标记的山羊抗小鼠IgG(A-21236，美国ThermoFisher Scientific公司)；……