张 轩，侯 静，曹海霞，黄登亮，张耀刚，袁馥梅，马艳艳

0 引 言

维生素A(Vitamin A, VA)是一种机体所必需、能维持细胞正常代谢且极易被忽视并造成缺乏的脂溶性维生素。在促进呼吸道上皮细胞增殖、分化中起重要的作用[1- 2]。临床研究发现血清VA水平与儿童呼吸道感染关系密切，机体VA越低，呼吸道感染的概率越高，感染症状越严重[3]，这可能与适当浓度VA能促进免疫细胞的分化成熟、提高机体的免疫能力有关[4]。众所周知线粒体是细胞的动力源泉，并且在调节免疫细胞激活、分化过程中也起着重要作用[5]，线粒体DNA能够激活主要的先天免疫信号通路[6]。研究显示免疫反应程度与细胞代谢状态有关，而线粒体作为细胞代谢的主要细胞器，对维持和建立免疫应答至关重要[7]。如氨基酸代谢影响T细胞分化和巨噬细胞极化；三羧酸循环部分中间产物，也参与了先天性和获得性免疫与炎症反应的部分过程[8]。因此，VA可能会通过影响线粒体功能对呼吸道上皮细胞起到一定的保护作用。故本研究通过用VA处理人主支气管上皮细胞(HNTEC)，检测线粒体相关指标的变化，初步探索VA对呼吸道上皮细胞线粒体功能的作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 细胞株人正常主支气管上皮细胞(HNTEC)购自中国科学院细胞库。

1.1.2试剂与仪器维生素A(Selleck，S5592)，二甲基亚砜DMSO(Solarbio，D8370)，特级胎牛血清(Biological Industries，04-001-1ACS)，0.25%胰酶(Gibco，27250018)，1640培养基(Gibco，23400-021)，CCK-8试剂盒(TransGen，FC101-04)，Taq DNA聚合酶(Invitrogen)，质粒抽提试剂盒(Qiagen)，DNA纯化试剂盒(Sangon Biotech)，Trizol(TaKaRa，9109)，反转录试剂盒(TransGen，AT311-03)，FastStart Universal SYBR Green Master(Roche，04913914001)，细胞成像微孔板检测系统(BioTek Cytation5)，细胞能量代谢分析仪(Agilent Seahorse XFe 96)，实时荧光定量……