刘晓亮 朱振安

在人工关节置换领域中，骨吸收活动亢进而造成的假体周围骨溶解、骨缺损是关节置换手术面临的重要挑战之一[1, 2]。而破骨细胞是维持骨吸收作用的主要细胞，因此如何通过抑制破骨细胞分化从而调节骨量稳定是当前防治人工关节假体周围骨溶解的研究重点。

紫云英苷(astragalin，C21H20O11，MW: 448.4g/mol)，是一种广泛存在于植物中的类黄酮化合物。许多研究表明类黄酮化合物具有能够促进成骨细胞分化、抑制骨关节内的炎性反应、抑制破骨细胞分化等生理作用[3, 4]。以往的研究中，紫云英苷在骨关节系统中被验证具有抑制骨关节炎、促进成骨分化的功效[5～7]。然而紫云英苷对破骨细胞分化的影响尚不得而知。因此，本研究通过使用核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB，RANKL)刺激C57BL/6小鼠的骨髓源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophage, BMM)向破骨细胞分化，并以此为基础研究了紫云英苷对小鼠BMM细胞向破骨细胞分化的影响。

材料与方法

1.实验试剂：CCK-8试剂盒购自日本Dojindo Molecular Technology公司，细胞因子M-CSF、RANKL购自美国R&D Systems公司，TRAP染色试剂盒、鬼笔环肽、DAPI荧光染液购自美国Sigma-Aldrich公司，紫云英苷(No.MB7087)购自大连美仑生物技术有限公司，Real-time PCR 试剂盒与RT-PCR反转录试剂盒购自日本TaKaRa公司，TRAP、NFATc1、CTSK、GAPDH引物购自生工生物(上海)股份有限公司。

2.实验动物：4～6周龄雄性C57BL/6 小鼠，购自上海市实验动物中心西普尔-必凯实验动物有限公司[生产许可：SCXK(沪)2013-0016；使用许可：SYXK(沪)2018-0026]。无特定病原环境下饲养。饲养规范遵循上海生命科学院实验动物指南及上海交通大学医学院相关规定执行。

3.细胞收集与培养：取4～6周龄的小鼠，处死后使用75%的乙醇溶液浸泡小鼠全身消毒20min。……