刘 娜 刘 斌 曹广林

心肌缺血再灌注(myocardial ischemia reperfusion，MI/R)损伤造成的氧化应激、炎性反应等，可导致心肌细胞凋亡、心肌纤维化，引起心功能障碍[1,2]。利拉鲁肽(liraglutide，LIR)是一种人胰高糖素样肽-1类似物，LIR可降低氧化应激水平，抑制高糖诱导的髓核细胞凋亡，还可抑制内皮细胞炎性反应，改善内皮功能障碍[3,4]。在MI/R中LIR具有抑制心肌细胞凋亡、改善心功能障碍的作用[5]。miR-93是一种微小核糖核酸(microRNA，miRNA)，在心肌梗死模型中具有促进血管再生、抑制心肌细胞凋亡和心肌纤维化、改善心功能障碍的作用[6]。但LIR能否通过miR-93发挥心脏保护作用仍需进一步研究，本研究建立MI/R大鼠模型，探讨LIR抗心肌损伤作用，为临床治疗提供参考。

材料与方法

1.实验动物和细胞系：SPF级雄性SD大鼠，60只，8周龄，体质量180～200g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物许可证号：SYXK(京)2017-0033；H9C2心肌细胞系购自美国ATCC公司。

2.试剂和仪器：LIR(丹麦诺和诺德制药公司)；anti-miR-93-5p和miR-93-5p mimic(美国RiboBio公司)；超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)试剂盒(南京建成生物工程研究所)；乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)，肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme-MB，CK-MB)，心肌肌钙蛋白I(cardiac troppnin I，cTnI)试剂盒(英国朗道公司)；兔抗大鼠第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(phosphate and tension homology deleted on chromosome ten，PTEN)，磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)，蛋白丝/苏氨酸激酶(serine/threonine protein kinase B，Akt)、p-Akt抗体(英国Abcam公司)；小动物呼吸机(中国瑞沃德生命科技有限公司)。

3. 分组与给药：60只大鼠随机分sham组、MI/R组、LIR组、anti-miR-93-5p组和anti-miR-93-5p+LIR组，每组12只。LIR组和anti-miR-93-5p+LIR组皮下注射LIR 70μg/kg，1次/天，连续8天，sham组、MI/R组和anti-miR-93-5p组皮下注射0.9%氯化钠注射液；第5天，anti-miR-93-5p组和anti-miR-93-5p+LIR组心肌内注射anti-miR-93-5p 200μl，sham组、MI/R组和LIR组大鼠注射0.9%氯化钠溶液。第8天给药后2h，除sham组外，其余大鼠结扎左冠状动脉前降支，以ST段抬高、左心室前壁变苍白为结扎成功，60min后松开结扎线灌注4h。……