郑翔宇，付宗强，张艳敏，郭伟胜

0 引 言

糖尿病是全球范围内的常见疾病，其发病率呈现逐渐上升的趋势。糖尿病以高血糖、葡萄糖不耐受等为特征，临床上以血糖增高为诊断特点，同时糖尿病还常伴随有脂肪、蛋白质、碳水化合物代谢紊乱等病理特征，也有很多学者将糖尿病称之为“糖脂病”[1]。研究显示，胰岛β细胞损伤是糖尿病发生的重要原因，也是当前体外模拟糖尿病常用的模型[2]。lncRNA是长度超过200核苷酸的非编码RNA，其在生物体内发挥重要作用，如：介导基因沉默、基因转录、基因翻译、基因修饰等；lncRNA的作用机制较为复杂，其能够通过影响下游基因的表达发挥多种生物学作用[3]。lncRNA NONRATT021972是近些年来研究发现的与人体正常生理活动和病理进展有关的调节因子，其参与心肌缺血星状神经节病理过程[4]。研究发现，NONRATT021972在糖尿病中表达上调，且下调NONRATT021972减轻2型糖尿病大鼠神经病理性疼痛[5]。下调NONRATT021972还能够改善糖尿病引起的神经节心率变异[6]。目前NONRATT021972在胰岛β细胞中的相关研究较少。本研究探讨下调NONRATT021972对糖脂毒性(高脂高糖)诱导的胰岛β细胞增殖和炎症因子表达影响，为分子靶向治疗糖尿病提供思路。

1 材料与方法

1.1 材料胰岛β细胞NIT-1购自武汉普诺赛生物科技有限公司；山羊抗兔HRP标记的二抗、兔抗C-Caspase-3抗体、兔抗TLR4抗体购自齐一生物科技(上海)有限公司；NONRATT021972 shRNA、shRNA control、TLR4过表达载体(pcDNA-TLR4)、空载体(pcDNA)均由苏州泓迅生物科技股份有限公司构建；兔抗C-Caspase-9抗体购自美国Abbkine；PrimeScript RT reagent kit with gDNA Eraser购自大连Takara。

1.2细胞培养及转染将胰岛β细胞培养在含有15%胎牛血清、25 mmol/L葡萄糖、0.25 mmol/L棕榈酸的DMEM完全培养基内，放置于37 ℃、含5%CO2培养箱内进行培养，细胞每2天更换一次培养液，融合率为80%进行传代培养。……