任 虹，刘 娟，于桂泳，李 美

0 引 言

骨关节炎是中老年人中常见的骨关节性疾病，主要是由关节软骨磨损遭到破坏产生的，软骨细胞凋亡是其重要的病理因素[1]。现有治疗方式有针灸、按摩、推拿、运动等非药物治疗；镇痛剂、维生素C、糖皮质激素及软骨保护剂等药物治疗；截骨术、关节融合等外科手术治疗[2]。而中医药治疗骨关节炎是一种更有效、成本更低、创伤更小的治疗方法[3]。杜仲因其有抗炎和抗骨质疏松等疗效而常被用来治疗骨伤科疾病，是一种重要的中药材。杜仲苷是杜仲的主要成分， 研究发现杜仲苷可以提高体外炎性环境下大鼠软骨细胞的增殖活力[4]。王胜楠等[5]研究发现杜仲苷能抑制IL-1β诱导的大鼠软骨细胞炎症、分解代谢、细胞凋亡及相关蛋白的表达。然而杜仲苷影响软骨细胞增殖和凋亡的分子机制尚未完全清楚。因此，本研究旨在研究杜仲苷对人骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响及其机制。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂胎牛血清、DEME培养基(美国Gibco公司)；RNA提取试剂盒、qPCR试剂盒(日本Takara公司)；细胞计数试剂盒-8、蛋白提取试剂盒、凋亡检测试剂盒(碧云天)。杜仲苷(HPLC≥98%，成都普菲德生物技术有限公司)。5810R离心机(德国Eppendrof公司)；Multiskan FC酶标仪(美国Thermo公司)；FACS caliber流式细胞仪、PowerPac蛋白电泳仪及Gel Doc XR+凝胶显示系统(美国BD公司)；LightCycler480 荧光定量PCR仪(美国Roche公司)。

1.2方法

1.2.1 人骨关节炎软骨细胞的分离培养骨关节炎软骨组织由当地骨科医院提供，具体操作方法参考文献 [5]，无菌条件下切碎软骨组织，0.15%的胶原酶充分消化，过22目细胞，400 g/min离心10 min，离心半径10 cm，去上清。……