赵 婷，袁 萌，晋湘宜，李 良，李俊微，方尚玲

(1.湖北工业大学生物工程与食品学院，湖北省酿造工艺与装备工程技术研究中心，湖北武汉430068；2.黄鹤楼酒业有限公司，湖北武汉430050)

酚酸脱羧酶(phenolic acid decarboxylase，PAD)是一种能够催化酚酸类物质发生非氧化脱羧反应(nonoxidative decarboxylation)的蛋白酶，可以催化分解酚酸类物质产生4-乙烯基衍生物[1]。酚酸类物质的4-乙烯基衍生物中的4-乙烯基苯酚有药物和辛香风味，可用于食品添加剂及香精香料行业[2-4]，对葡萄酒和其他发酵食品和饮料的香气形成具有重大贡献[5]。

酶在温和的反应条件下（低温和低压下，pH值介于5～8之间）具有较高活性，还能减少副反应的发生[6]。但由于受到温度、pH值、酶液浓度、溶剂等因素的影响，游离酶的催化活性很低甚至容易失活。酶的固定技术可以克服这些问题，与游离酶相比，固定化有助于增强酶在苛刻环境中的稳定性，提高酶的催化活性和储存稳定性；另外，固定化酶可以更快速地从反应体系中分离出来，从而最大限度地减少或消除产物对酶的污染，促进了酶的有效回收和循环利用[7-9]。

本试验从解淀粉芽胞杆菌中克隆表达得到了酚酸脱羧酶的重组菌株，分别选用壳聚糖、海藻酸钠、大孔树脂，不同的交联剂进行酶的固定化，并对壳聚糖固定酚酸脱羧酶进行优化，从而确定酚酸脱羧酶的最佳固定方案，使其能够更好的应用于实际生产。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂及仪器

菌株细胞：解淀粉芽胞杆菌，本实验室保存；大肠杆菌感受态细胞DH5α和BL21(DE3)，天根生化科技(北京)有限公司。……