郝晓娜，朱茂信，刘 微，闵思敏，薛晓宇，张英杰

(蚌埠医学院检验医学院，安徽蚌埠 233030)

原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是一种常见的威胁人类健康的恶性肿瘤，我国是受其危害最严重的国家之一，发病率和死亡率约占全球的50.0 %[1]。肝癌以手术治疗为主，放射治疗和化学药物治疗为辅。但对于术后、晚期肝癌和复发患者，化疗仍是肝癌治疗的重要手段之一。目前，临床上常用的药物有顺铂、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素等，但有部分患者在治疗中会出现耐药现象。如何降低肝癌细胞对化疗药物的耐药、提高化疗疗效是我们目前亟待解决的问题。miRNA是一类内源性的非编码单链RNA，长度约19～25个核苷酸。随着对miRNA研究的深入，发现miR-122具有肝脏特异性，成年个体肝脏中总miRNA的70.0 %是miR-122[2]。研究发现，miR-122在肝癌的发生、发展中起者重要作用，其在肝细胞癌组织中表达显著下调[3-5]。因此，本研究旨在观察过表达miR-122的肝癌细胞株HepG2对化疗药物的敏感性，并阐明部分机制，为肝癌的发病机制研究和治疗方法提供新思路和实验基础。

1 材料与方法

1.1实验材料 细胞株为人肝癌细胞系HepG2，由蚌埠医学院检验医学院实验中心保存备用。主要试剂包括DMEM培养液(Invitrogen 公司)，10.0 %胎牛血清(杭州四季青)，胰蛋白酶(宝泰克生物技术有限公司)，PBS缓冲液(自制)，过表达miR-122和绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒(human miR-122a Virus)及空载病毒(LV3-NC Virus)，由上海吉玛基因化学技术有限公司合成，逆转录PCR试剂盒、real-time PCR试剂盒购于大连TaKaRa公司，Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式试剂盒(Solarbio)、Bcl-2和p53单抗(Bioworld Technology)。

1.2方法

1.2.1LV3-human miRNA-122a mimics慢病毒过表达载体的制备 根……