刘江帆，魏丹丹，李朝红

(河南省直第三人民医院 呼吸与危重症医学科，河南 郑州450000)

肺癌是最常见的癌症之一[1-2]。微小RNA(MicroRNA，miRNA/miR)是一类长度约为22个核苷酸的短链非编码RNA，参与细胞周期、增殖、凋亡等不同的细胞生理过程[3]。越来越多的证据表明，miRNA在癌细胞中异常表达，被认为是治疗癌症的潜在靶点/药物，包括肺癌[4]。有学者对肺癌中差异表达的miRNA进行筛选发现，miR-412-5p在肺癌中高表达，且发现miR-412-5p在肺癌中上调，表达量约为正常组织的4倍[5-6]，原钙黏蛋白10(PCDH10)基因位于人类染色体4q28.3上，是一种肿瘤抑制基因，在多种恶性肿瘤中下调表达[7]，研究发现PCDH10在肺癌中低表达，过表达PCDH10对细胞增殖、迁移、侵袭具有抑制作用[8]，但miR-412-5p与PCDH10靶向关系尚未可知，本研究以肺癌细胞A549为实验对象，考察miR-412-5p对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

肺癌细胞A549购自中科院上海细胞库，RPMI-1640培养基(Roswell Park Memorial Institute)、胎牛血清购自Gibco公司，Trizol、Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司，PCDH10(货号ab172709)、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloprotease-2，MMP-2)(货号ab86607)购自Abcam公司，甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)(货号51332)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)(货号2978)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)(货号14472)抗体购自美国Cellular Signaling Technology公司，辣根过氧化物酶标记二抗(货号bs-40296G-HRP)购自北京博奥森生物技术有限公司，miR-412-5p、anti-miR-412-5p、si-PCDH10及各自阴性对照购自上海GenePharma公司，RIPA裂解液、双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自碧云天生物技术研究所。

1.2 临床组织标本

46例肺癌组织及癌旁组织来源于河南省直第三人民医院因肺癌而接受手术治疗的患者。患者手术前未接受过任何放、化疗的治疗。实验前获得每位患者的知情同意书，经医院伦理委员会批准通过。……