吴金兰，万福生

(南昌大学a.第四附属医院临床实验科；b.医学部生化与分子生物学教研室，南昌330006)

卵巢癌是妇科三大恶性肿瘤之一，病死率居妇科恶性肿瘤之首[1-2]，其侵袭转移特性是病死率高的重要原因。结肠癌转移相关基因1(metastasis associated in colon cancer 1，MACC1)最早被发现是与结肠癌发生及转移密切相关[3]。近几年发现MACC1异常表达与胃癌[4-5]、乳腺癌[6]和肺癌[7]等的转移和预后密切相关，但对卵巢癌细胞的增殖与凋亡研究较少。磷脂酰肌醇-3-羟基激酶(phophatidylinsotitol-3-kinase，PI3K)/丝/苏氨酸激酶(serine/threonine kinase，AKT)信号通路是细胞内信号转导的重要环节，参与细胞代谢[8-10]、细胞增殖与分化、凋亡等过程[11-12]，在多种肿瘤的发生、发展及转移中起着重要的作用。本研究以卵巢癌SKOV3细胞株为对象，观察沉默MACC1基因对卵巢癌细胞增殖、凋亡与迁移的影响，并从PI3K/AKT信号通路方面探讨其分子机制，以期为后续更多的防治研究提供新思路。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和抗体

人上皮性卵巢癌细胞株SKOV3购于北京肿瘤医院。MACC1抗体、PCNA抗体、PI3K抗体、p-AKT抗体及cleaved caspase 3抗体购于美国abcam公司；LipofectamineTM2000转染试剂盒购自于美国Invitrogen公司；噻唑蓝(MTT)购于美国Ameresco公司；AnnexinV-FIFC/PI购于南京凯基公司；RPMI-1640培养基及胎牛血清均购于美国GIBCO公司；胰蛋白酶及PBS购于北京Solarbio公司；siRNA MACC1及siRNA阴性由广州锐博有限公司合成。

1.2 实验分组及细胞转染

SKOV3细胞常规培养至对数生长期后，按照LipofectamineTM2000转染试剂盒说明书进行操作。实验分3组：正常对照组、阴性对照组和si-MACC1组。正常对照组：常规培养后更换无血清培养基培养6 h；阴性对照组：常规培养后转染阴性对照siRNA 6 h；si-MACC1组：常规培养后转染si-MACC1 6 h。……