贾丙申 于鹏 焦拓 李君 李明 曲国欣 纪志华 付昆

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种慢性全身性自身免疫性疾病。临床表现为滑膜慢性炎症性增生和肥大及手足关节损伤［1］。研究证实，成纤维样滑膜细胞（fibroblast⁃like synovio⁃cytes，FLS）在RA 的发病过程中发挥关键作用，其增殖和侵袭能力的增强与RA 的发展密切相关［2⁃3］。因此，探究调控RA⁃FIS 细胞增殖和侵袭迁移的分子机制对于改善RA 至关重要。近期研究证实，脂肪间充质干细胞（adipose mesenchymal stem cell，ADSC）可通过改变早期适应性T 细胞反应来调节实验性自身免疫性关节炎［4］；ADSCs 分泌的外泌体能够降低骨关节炎软骨细胞的炎症反应［5］。此外有文献报道，外泌体miRNAs 在RA 中发挥重要调控作用［6］，miR⁃212⁃3p 定位于17p13.3，参与调控多种疾病的发展，且能够抑制RA⁃FLS 细胞增殖，促进其凋亡［7］。但鲜有文献报道ADSC 外泌体对RA⁃FLS 细胞生物学行为的影响及作用。本研究将从细胞水平探究ADSC 外泌体中miR⁃212⁃3p 对RA⁃FLS 细胞行为的调控及其分子机制。

1 材料与方法

1.1 标本来源与试剂

收集海南医学院第一附属医院骨科类风湿性关节炎（RA）患者（20 例）和健康者（20 例）血清，患者均已签署知情同意书，并通过医院伦理委员会批准。人正常滑膜细胞FLS、人类风湿性关节炎滑膜细胞RA⁃FLS 和ADSCs 细胞购于北纳生物细胞库。DMEM 和胎牛血清购自美国Biological Indus⁃tries 公司；Lipofectamine 2000 购于日本TaKaRa 公司；CCK⁃8 试剂盒购于日本同仁公司；Transwell 小室购买于美国Corning Incorporated 公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购于Promega 公司；RT⁃qPCR引物、antagomiR⁃212⁃3p、miR⁃212⁃3p mimics 及阴性寡核苷酸由上海吉玛制药技术有限公司提供；抗体均购自美国CST 公司。

1.2 ADSCs 细胞培养及外泌体分离

将ADSCs 细胞于含10%胎牛血清的DMEM培养基中培养，或在培养液中加入antagomiR⁃212⁃3p；……