周 雪

(沈阳医学院附属第二医院,辽宁 沈阳 110000)

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 研究对象：Lewis大鼠55只，SPF级，均为雄性，周龄为8周，体重200～220 g，平均(213.24±4.66) g，由广东省医学实验动物中心提供[许可证号：SCXK(粤)2018-0002]。饲养在动物房中，温度21～23 ℃，相对湿度50%～60%，定时通风换气保持空气洁净，噪音<50 dB，大鼠于笼内自由活动进食，饲以全价营养颗粒饲料和无菌过滤水，定期打扫鼠笼并消毒。饲养5 d使其适应环境。

1.1.2 主要药品与试剂：纯化猪心肌肌球蛋白，美国Sigma公司产品，采用0.3 mol/L氯化钾溶液溶解并配制为浓度10 mg/ml的猪心肌肌球蛋白溶液，-80 ℃保存备用；完全弗氏佐剂，美国Sigma公司产品；灭活结核杆菌H37Ra，购自碧迪医疗器械(上海)有限公司。三七总皂苷，CAS号：88105-29-7，纯度：UV≥95%，货号：YDS0054，规格：每瓶10 mg，购自无锡云萃生物科技有限公司，用蒸馏水溶解制成三七总皂苷溶液，浓度分别调整成10、20 mg/ml；甲氨蝶呤片，规格：每片2.5 mg，国药准字H31020644，批号：20190112，上海上药信谊药厂有限公司生产，使用时采用蒸馏水溶解配制成浓度为0.1 mg/ml的甲氨蝶呤混悬液，现用现配。苏木素伊红(HE)染色试剂盒、TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(一步法)、4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamino-2-phenylindole，DAPI)染色液，购自南京凯基生物科技发展有限公司；RIPA裂解液(含苯甲基磺酰氟)、磷酸盐缓冲液(Phosphate buffer，PBS)、TBST缓冲液，购自北京索莱宝科技有限公司；二喹啉甲酸(Bicinchoninic acid，BCA)法蛋白定量检测试剂盒、SDS-PAGE凝胶制备试剂盒，购自福州飞净生物科技有限公司；Bcl-2、Bax、Caspase-3免疫组化试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)法显色试剂盒，购自北京伊塔生物科技有限公司；兔抗Bcl-2、Bax、Caspase-3、肌动蛋白(β-actin)多克隆抗体、山羊抗兔二抗、ECL发光试剂盒，购自翌圣生物科技(上海)有限公司。

1.1.3 主要仪器设备：超高分辨率小动物超声影像系统(加拿大Visual Sonics，Vevo2100型)；离心机[德国Hettich，Universal 320(R)型]；光学显微镜(日本Nikon，Eclipse Ci型)；……