沈镇扬，王俊俊，陆伦根，蔡晓波

慢性肝病时，肝祖细胞的增殖形式主要表现为胆管反应[1-3]。Hippo信号通路与细胞增殖密切相关，Yes相关蛋白(Yes-associated protein，YAP)作为其核心效应分子在其中起到了重要的作用[4-9]。本研究构建了胆碱缺乏、乙硫氨酸补充(choline-deficient、 ethionine-supplemented， CDE)饮食小鼠模型，并采用免疫组化染色观察到模型组肝组织胆管反应增多，经Western blot和qPCR方法检测发现模型组肝组织YAP表达增高，免疫荧光染色进一步确定模型组肝祖细胞YAP表达增强。本研究在体外通过YAP过表达和敲减慢病毒感染肝祖细胞，并采用EdU和CCK8检测证明肝祖细胞YAP过表达能促进细胞增殖，而敲减YAP后细胞增殖减弱，以上研究为慢性肝病肝再生的调控机制和治疗研究提供了新的思路。

1 材料与方法

1.1 动物、病毒与试剂 6～8周龄雄性野生型C57BL/6J小鼠购自维通利华实验动物公司，饲养在上海市第一人民医院实验动物中心；过表达慢病毒和敲减慢病毒购自上海吉凯基因公司；William’E培养基、胎牛血清、青霉素和链霉素等细胞培养液均购自美国 Gibico公司；蛋白提取试剂，BCA 蛋白浓度测定试剂等购自上海雅酶生物公司；RNA 提取试剂、逆转录试剂和qPCR试剂均购自日本TAKARA公司；抗YAP抗体、荧光标记的二抗购自美国CST公司；抗GAPDH抗体和辣根过氧化物酶标记的二抗购自上海生工生物公司；抗CK19抗体购自武汉塞维尔公司；细胞计数试剂盒8-CCK8(日本Dojinto公司)；EdU增殖检测试剂盒(广州锐博生物公司)；免疫组化试剂盒(上海基因科技公司)；HE染色试剂盒(武汉赛维尔公司)。

1.2 CDE饮食小鼠模型制备 将15只小鼠随机分成3组，每组5只。……