薛强　王燕飞　盛万里　陈艳　金涌　邹明强

摘    要：为快速获取与鉴定黄瓜基因组DNA，建立一种基于纤维素膜吸附的黄瓜基因组DNA快速提取方法，以市售华北型黄瓜为材料，制备纤维素膜片，筛选黄瓜裂解试剂，优化提取反应条件，建立了包括黄瓜裂解、膜片吸附、膜片清洗、核酸洗脱等步骤的黄瓜基因组DNA提取方法，可以在5 min内从黄瓜果实中提取基因组DNA用于PCR扩增。黄瓜果实的表皮、表层果肉和中心果肉都可以实现基因组DNA提取和PCR扩增，最少可以从13 mg黄瓜果实中提取并检测到黄瓜管家基因Act1片断。利用膜吸附DNA提取技术实现了黄瓜基因组DNA的快速提取，为黄瓜基因研究与快速鉴定提供了一种简便方法。

关键词：黄瓜;膜吸附;基因组DNA提取

中图分类号：S642.2 文献标志码：A 文章编号：1673-2871（2021）10-039-05

A rapid extraction method of cucumber genomic DNA based on cellulose membrane adsorption

XUE Qiang1， WANG Yanfei2， SHENG Wanli3， CHEN Yan1， JIN Yong1， ZOU Mingqiang1

（1. Chinese Academy of Inspection and Quarantine， Beijing 100123， China; 2. Solid Waste and Chemicals Management Center， Ministry of Ecology and Environment of the People's Republic of China， Beijing 100029， China; 3. Technical Center of Hohhot Customs District， Hohhot 010020， Inner Mongolia， China）

Abstract： In order to quickly obtain and identify cucumber genomic DNA， a rapid extraction method of cucumber genome DNA based on cellulose membrane adsorption is established. After preparation of cellulose membrane， development of lysis reagents， optimization of extraction conditions， a method includes cucumber lysis， membrane adsorption， membrane cleaning and nucleic acid elution was established. Genomic DNA of cucumber fruit could be extracted in 5 min and directly used for PCR amplification. Genomic DNA could be extracted from cucumber fruit epithelium， surface flesh and central flesh. And house-keeping gene Act1 fragments can be amplified from the 13 mg of cucumber fruit. Cucumber genomic DNA could be extracted quickly by using membrane adsorption DNA technology. It provides an easy method to research and rapid identification of cucumber gene.

Key words： Cucumber;Membrane adsorption;DNA extraction

黃瓜是遍布世界的重要蔬菜，黄瓜基因组计划已经完成，基因组学研究方法正在如火如荼地展开，在抗病性、抗虫害、抗逆性、抗除草剂、品质改良等方面进行了多项研究[1]，在涉及黄瓜基因的众多研究与鉴定方法中，对黄瓜基因组DNA的检测鉴定是最常用到的试验方法。

在黄瓜DNA的检测鉴定中，首先要提取黄瓜基因组DNA，目前常用的提取方法是CTAB法[2]和SDS法[3]，都要以新鲜叶片为原材料，需要研磨和离心等步骤，费时费力，而且市售的黄瓜一般也不带有叶片，直接用黄瓜果实进行提取和鉴定更为便利。商品化试剂盒多采用硅膜吸附离心法与磁珠吸附法。应用硅膜吸附离心法，在高浓度超离液盐存在的情况下将黄瓜裂解后游离的基因组DNA与固体硅膜支撑物结合，然后通过一系列清洗和离心步骤去除杂质，最后在低浓度盐溶液中从硅膜洗脱核酸[4]。……