刘旭明，尚天甜，彭淑珍，鲁强生，曾巧英*，彭婕*

(1. 甘肃农业大学动物医学院，甘肃 兰州 730070；2. 兰州市兽医中心，甘肃 兰州 730030)

由传染性病原体引起的乳房炎被认为是奶牛的一种破坏性疾病，表现为乳汁发生理化性质及细胞学特性的改变，以及乳腺组织发生病理学变化，最终降低奶牛生产性能，给奶业造成巨大的经济损失[1-2]。无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)为兰氏分群B群链球菌(group B streptococcus，GBS)，是引起奶牛乳房炎的主要病原之一，也是一种能够引起人和其他动物发生严重感染的病原菌[3]。近些年，构建乳房炎模型成为研究相关致病机制的一个重要方向，若直接使用奶牛作为试验动物，其成本较高，管控较复杂，因此，用小鼠构建乳房炎模型愈来愈成为研究热点[4]。相对于奶牛，小鼠具有体积小、易操控、成本低等特点。本研究旨在分离并鉴定致病性无乳链球菌并构建小鼠乳房炎模型，为进一步研究该菌致乳房炎的相关致病机制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

昆明系孕鼠购买于中国农业科学院兰州兽医研究所。无乳链球菌参考株ATCC 13813、药敏试验质控菌株金黄色葡萄球菌ATCC 25923由本实验室保存。无菌脱纤维绵羊血、琼脂粉末购自北京索莱宝科技有限公司，PrimeScriptTMRT Master Mix(Perfect Real Time)购自TaKaRa公司，AceQ®qPCR SYBR Green Master mix、2×TaqPlusMasterMix(Dye Plus)购自诺唯赞生物科技股份有限公司，胰酪大豆胨粉末(TSB)购自BD公司。药敏试纸及生化反应管均购自杭州滨和微生物试剂有限公司，TRIzol®Reagent购自Ambion公司，分析纯甲醛溶液、分析纯无水乙醇溶液购自天津市百世化工有限公司。

1.2 无乳链球菌分离鉴定

1.2.1 奶样采集