千慧燕，王浩，杨冰祎，闵鹏飞，张爽，贾立军*

(1. 东北寒区肉牛科技创新教育部工程研究中心/延边大学，吉林 延吉 133002；2. 延边大学农学院，吉林 延吉 133002)

弓形虫(Toxoplasmagondii) 属于真球虫目弓形虫科，是一种专性细胞寄生原虫[1]。在世界范围内流行，具有广泛的宿主群，哺乳动物、鸟类、人都是它的中间宿主[2-4]。弓形虫病是人兽共患寄生虫病，严重威胁人类健康，并能引起家畜死亡，造成严重经济损失[5-8]。弓形虫入侵宿主的过程是由多种分泌蛋白介导完成，这些分泌蛋白主要来自弓形虫顶端复合体微线体蛋白(MICs)、棒状体蛋白(ROPs)和致密颗粒蛋白(GRAs)等分泌型细胞器[9-11]。

MICs在弓形虫识别、附着和入侵宿主细胞过程中起重要作用[12]。在虫体与宿主细胞接触早期，MICs最先从速殖子顶端分泌，通过识别宿主细胞膜上的受体进行黏附；随之ROPs分泌到宿主细胞膜的棒状体颈部蛋白RONs与MICs的顶膜抗原AMA1形成移动连接[13-14]。MIC11位于微线体前端，属于钙离子依赖性蛋白，具有在成熟之前移除内部前肽的特性[15-16]，其表达具有部分限制性，在速殖子和子孢子期有表达，缓殖子期不表达[17]。MIC11水解部位在其肽链中间，而其他微线体蛋白水解部位在其C-末端或N-末端[18]。目前关于弓形虫MIC11基因的研究报道较少，本试验利用CRISPR/Cas9技术对MIC11基因进行敲除，并通过乙胺嘧啶、绿色荧光蛋白(GFP)标记及PCR等方法筛选MIC11基因敲除株，以期为弓形虫MIC11基因的后续研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 虫体与实验动物

弓形虫RH株、Vero细胞均由延边大学预防兽医实验室保存，清洁级BALB/c小鼠购自延边大学实验动物中心，6～8周龄30只。……